徐雪亮 王奋山 刘子荣 范琳娟 季香云 蒋杰贤 姚英娟

（1. 江西省农业科学院农业应用微生物研究所，南昌 330200；2. 上海市农业科学院生态环境保护研究所，上海 201403）

1 RNAi沉默基因机制

RNAi是由外源双链RNA（Double-stranded RNA，dsRNA）介导引起的目的基因mRNA沉默的现象［1］。自Fire等［2］1998年首次报道了注射外源dsRNA可造成秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）内源性mRNA沉默的现象以来，RNAi已迅速成为研究基因功能、调控和有机体层面的反向遗传学技术手段。随着RNAi技术的快速发展与应用，其在病虫害防治管理方面也显示出了巨大的潜力，并在双翅目、鞘翅目、膜翅目、半翅目、直翅目及鳞翅目等许多昆虫中已经得到了成功应用［3］。

目前已知动物中存在3种不同类型的小RNA可以触发相应的RNAi通路。第一种是由短/小干扰RNA（Short/small interfering RNA，siRNA）调控的siRNA通路，siRNA由外源或内源的dsRNA加工为长度一般为19-21 bp的dsRNA；第二种是由微小RNA（MicroRNA，miRNA）调控的miRNA通路，miRNA是长度21-24 bp的单链非编码RNA；第三种是与PIWI（P-element induced wimpy testis）蛋白相互作用的小RNA（piRNA）调控的piRNA通路，piRNA是长度23-36 bp的单链RNA［4］。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的dsRNA时，该mRNA发生断裂而导致基因表达沉默。当dsRNA（外源或自身产生）进入细胞后，首先由RNaseIII核酸酶家族的Dicer与dsRNA结合，随后dsRNA被降解成19-21 bp长度的小干扰RNA（Small interfering RNA，siRNA），然后siRNA与RNA诱导沉默复合体（RNA-induced silencing complex，RISC）结合，再解旋成单链RNA，并由该复合体主导RNAi效应［5］。RISC被活化后，受siRNA引导（Guide-strand），通过碱基互补配对特异性地结合在同源mRNA（靶标）上，切断标靶mRNA，引发靶标mRNA的分解，从而引发目标基因的表达沉默。

2 双链RNA的转运机制

一般来说，dsRNA进入生物体内后才能诱导RNA干扰反应。目前有两种潜在的机制：秀丽隐杆线虫体内跨膜通道介导的途径和果蝇S2细胞通过吞噬作用的途径。……