才德吉 措毛吉 万玛南杰

青海红十字医院1呼吸内科，2产科，3小儿外科（西宁810000）

非小细胞肺癌（non small cell lung cancer，NSCLC）发生率约占肺癌80%以上，5年生存率不足20%［1-2］，由于目前对肺癌的发病机制尚未明确，晚期肺癌尚无有效的化疗药物［3⁃4］，世界范围内肺癌发病率和死亡率均居恶性肿瘤第一位。肿瘤坏死因子α诱导蛋白TIPE（tumor necrosis factor⁃α⁃induced protein 8，TNFAIP8）基因家族是新发现的一类癌基因家族［5］，在胰腺癌、胃癌等肿瘤组织中呈高表达状态，近年来研究表明TIPE 可能与肺癌的发生发展有关［6-7］。虽然有研究报道TIPE与肺癌细胞迁移、化疗敏感性有关，但迄今为止，TIPE在肺癌发生发展中的作用机制尚未明晰。有研究发现TIPE 可能通过Wnt/β⁃catenin 信号通路调控细胞生物学特性，Wnt 信号通路是传递细胞生长刺激信号的一类重要通路，其异常活化与肿瘤的生长和转移密切相关［8］。本实验通过沉默非小细胞肺癌A549 细胞中TIPE 基因的表达，检测β⁃catenin在非小细胞肺癌细胞中的表达，为明确TIPE 基因、Wnt/β⁃catenin 信号通路在非小细胞肺癌中的机制研究初步奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料人非小细胞肺癌细胞系A549 购自中国科学院上海细胞库；DMEM 培养基、10%胎牛血清（美国Sigma 公司）；TIPE、β⁃catenin 抗体（美国Abcam 公司）、流式凋亡检测试剂盒（南京凯基生物科技发展有限公司）；RT⁃PCR 逆转录试剂盒（美国Thermo 公司）；CCK8 试剂盒购自上海碧云天生物科技有限公司；GFP 荧标记的shRNA⁃TIPE 慢病毒载体、TIPE、β⁃catenin、β⁃actin 引物序列由上海生工生物工程有限公司构建制备（表1）。

表1 TIPE、β⁃catenin、β⁃actin 引物序列Tab.1 Primer sequences of TIPE，β⁃catenin and β⁃actin

1.2 方法

1.2.1 非小细胞肺癌细胞系A549 培养及shRNA⁃TIPE 慢病毒转染将非小细胞肺癌细胞系A549放入10%胎牛血清的DMEM 培养基中培养，培养条件：37 ℃、5%CO2。……