应用DNA提取改良和二次聚合酶链反应技术检测乌头及其炮制品
2021-01-21朱高倩李双良马莉周培军蒲星宇王丽符德欢
朱高倩, 李双良, 马莉, 周培军, 蒲星宇, 王丽, 符德欢
(1.云南省药物研究所,云南昆明 650111;2.云南白药集团创新研发中心,云南昆明 650111;3.云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室,云南昆明 650111)
乌头类药物有较为悠久的传统用药历史,具有祛风除湿、温经止痛等功效,广泛应用于风湿麻痹、关节疼痛等临床治疗中,在各类成药制剂、药材标准中占比较大[1]。该类药材均来自毛茛科(Ranunculaceae)乌头属(Aconitum)植物根茎。乌头属种类繁多,分布广泛,全球约有350种,我国约有167 种[2],仅云南省境内就有约66 种,25 变种,4 变型[3]。《中华人民共和国药典》2000 年版、2005 年版、2010 年版、2015 年版等标准均有记载乌头类药材[4-7]。《中华本草》记载了60多种乌头属植物可入药[8]。目前,《云南省中药材标准》收载的乌头类药材仅有黄草乌一种[9],但当地民间还将乌头属其他种也当作乌头类药材使用。目前,有些非国标或非省标的乌头属植物被盲目栽培,市场上充当国标或省标药材销售,难以通过产地判断乌头属药材的基原,市场上充斥了大量以国标或省标正品名销售的混伪品,加之乌头属种间的化学成分种类、含量可能会存在差异[10-12],炮制前混杂的品种经过统一的炮制方法炮制后,导致有效成分(或有毒成分)含量可能不在预期范围内,进而导致入药后无效、低效或中毒。
目前,对于乌头属药材的鉴别,单纯通过性状、显微、理化等方法已不能满足市场药材种源鉴定的需求,研究发现,ITS、psbA-trnH 对乌头属植物具有一定的鉴别能力[13-14]。2015 年版《中华人民共和国药典》首次收载了“中药材DNA 条形码分子鉴定法指导原则”,植物类中药材选用ITS2/ITS 为主体序列,以叶绿体psbA-trnH 为辅助序列[7]。……
