ODAH Kokou Ayefounin，董文龙，ATIAH Luke Atiewin，刘 磊，王一鸣，贾博岩，孔令聪，高云航，马红霞

(吉林农业大学动物科学技术学院，吉林 长春 130118)

1999年，Angen等根据菌种的表型及其基因特性将溶血曼氏杆菌，Mannheimiaglucosida,Mannheimiaruminalis,Mannheimiagranulomatis，Mannheimiacaviae,Mannheimiavarigena共6种菌归类为新的曼氏杆菌属[1]。Mannheimiavarigena是存在于多种反刍动物的上呼吸道及肠道的正常菌群，当动物机体抵抗力低下时，也可引起牛的肺炎及乳腺炎等[2-3]。目前鲜有关于该菌致病性及耐药性的报道。本试验从吉林省某牛场病死牛的肺脏内分离到1株Mannheimiavarigena，为进一步了解这种病原特性，对其各种生物学特性、所导致的病理学变化及耐药表型进行初步研究，试验数据为该菌致病机制及耐药机制的深入研究提供科学依据，同时也为临床治疗该菌所引起的疾病提供参考。

1 材料与方法

1.1 病料来源 吉林省某牛场，1例病死牛，无菌采集肺脏送检，进行病原菌的实验室分离培养。

1.2 试剂及培养基 TSA固体培养基、TSB液体培养基，均购自青岛海博生物技术有限责任公司;氟苯尼考等10种抗生素标准品，均购自中国食品药品检定研究院。细菌基因组 DNA 快速抽提试剂盒，购自生工生物工程(上海)股份有限公司。10× Buffer、dNTP、ExTaqDNA聚合酶、切胶回收试剂盒、pMD18-T载体及E.coliDH5α感受态细胞，均购自宝生物工程(大连)有限公司。

1.3 细菌的分离与纯化 在采集的牛肺脏表面用剪刀烫出一处无菌表面，无菌手术刀沿着无菌面切入，用接种环伸入刀口沾取病灶黏液，接种于TSA平板(含5%胎牛血清)上，37 ℃需氧培养12 h后进行纯化培养，直至镜检细菌形态均一为止，将纯化获得的菌株命名为Mv-1。……