通用型和O型口蹄疫病毒二重荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用
2021-01-21王淑娟王东方杨海波赵胜杰曹伟伟赵雪丽马震原闫若潜
王淑娟,王东方,刘 影,杨海波,赵胜杰,曹伟伟,王 翠,赵雪丽,马震原,闫若潜
(河南省动物疫病预防控制中心,河南 郑州 450008)
口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的一种急性、烈性、高度传染性、水疱性疾病,以发热,唇部、口腔黏膜、乳房及蹄部出现烂斑或水疱性病理变化为典型的临床特征[1-3]。该病主要感染牛、水牛,绵羊、山羊和猪在内的70多种偶蹄目动物[4]。该病广泛流行于世界各地,严重影响畜牧业生产、动物及其产品的流通和国际贸易,造成巨大的经济损失,世界动物卫生组织(OIE)和联合国粮农组织(FAO)将其列为A 类动物传染病之首,我国也将其列为一类动物疫病。
FMDV分为O型、A型、C型、亚洲Ⅰ型 (AsiaⅠ型)等7 个血清型[5],各血清型的分布极其不均匀,A 型、O型、C型和AsiaⅠ型广泛分布,主要在欧洲、美洲、亚洲、非洲地区出现[6]。亚洲以东亚、东南亚和邻接中东地区疫情较严重,流行血清型以 A 型和 O 型为主[7],我国以O型为主[8]。
FMDV感染猪以后引起的临床症状与塞尼卡病毒病、猪水疱病和水疱性口炎等难以区分,仅凭借临床症状和病理变化诊断FMDV存在一定困难。因此,建立一种快速、特异、敏感地检测FMDV的检测方法势在必行。病毒分离是检测病毒最可靠的方法,但该方法操作麻烦,检测周期长且需在特定的实验室中才能进行。病原核酸检测是实验室诊断最常用的方法,目前国内外已经建立了多种FMDV 核酸检测方法。酶联免疫吸附试验(ELISA)、反向间接血凝试验等方法敏感性不高; 国内外学者建立的RT-PCR和多重反转录聚合酶链式反应(mRT-PCR) 方法[9-10],虽然具有较快速、特异的特点,但需要制胶、电泳等后续鉴定工作,操作复杂,而且增加了对实验室的污染 ;……
