西安医学院口腔医学院 陕西 西安 710021

变异链球菌(Streptococcus mutans,S．mutans,以下简称为变链菌)一直被认为是最重要的致龋菌[1],在人们的口腔微环境中占有很关键的生态地位。在其诸多致龋的特性中,耐酸性是一个非常关键的因素。耐酸性主要是指细菌能在酸性环境中生长,并在这种环境下代谢碳水化合物产酸的水平。耐酸性包括了2个层面的概念[2－3],分别被称为基本耐酸(Constitutive acidtolerance)以及耐酸反应(Acid tolerance response,ATR)。此次实验中介绍了变链菌标准株和LuxS缺陷株分别在不同p H值酸性环境下的生长状况,为下一步的研究奠定基础。

1 材料与方法

1．1 实验菌株和培养基 变链菌Ingbritt C国际标准株及本实验室成功构建并保存的LuxS基因缺陷株[3];TSA固体培养基及牛心脑浸液培养基(BHI)。

1．2 仪器设备和试剂 紫外分光光度计,美国BECKMAN公司;TGL－16C高速冷冻离心机,上海飞鸽;电热恒温水浴箱,杭州蓝天化检仪器厂;隔水式恒温培养箱,上海安亭科学仪器厂;R200电子天平,德国;进口96孔微量板。

1．3 实验方法 将变链菌Ingbritt C标准株和LuxS缺陷株常规复苏,提纯鉴定为纯菌后,分别于4℃、3 000 r/min离心l5min并弃去上清液,将收集的细菌沉淀物用无菌生理盐水稀释,振荡器振荡混匀1 min后,用紫外分光光度计于600 nm处调整制备为吸光度(A)约为0．7的菌悬液备用。

配制p H值3．5～7．0、间隔0．5的一系列BHI液体培养基,按照l∶10(V/V)的比例将两种菌液接种于BHI液体培养基,两种菌株均培养48 h,并设置为3份样品。离心弃清后逐一测定吸光度值,以无菌生理盐水为阴性对照。将两菌液接种于配制好的p H值3．0的BHI液体培养基,在酸化培养前后分别取样稀释,菌液浓度在菌落计数器上计数并推算出来,算出的比值即酸化前后菌液浓度之比,又称之为生存率。……