赵楠楠，王艳，郭艳娟，高杰，袁金灵，陈燕

(华北理工大学附属医院，河北唐山 063000)

哺乳动物胚胎发育过程中第一个可见的分化事件是内细胞团(inner cell mass，ICM)和滋养外胚层(trophoectoderm，TE)的分离。ICM是一群多能细胞，附着在TE的内部，形成胎儿和胚胎外组织。相反，TE是围绕囊胚腔发育成胎盘的单层极化细胞[1]。ICM和TE的分离由涉及多个基因相互作用的单独的发育程序调节。

Oct4和Cdx2两种转录因子对ICM和TE谱系的分离和功能发挥是必需的。Oct4(Pou5f1)是POU转录因子家族的一员，在囊胚腔形成后仅在ICM中表达，对维持细胞多能性和正常分化为表皮细胞的过程不可或缺[2]。Cdx2是正确的细胞命运决定和TE分化所需的TE特异性转录因子[3]。Cdx2、Sox2和Nanog是Oct4的已知靶点，三者通常形成网络共同调控其他靶点基因。Oct4基因与Sox2、Nanog共同形成和维持胚胎干细胞的多能性和自我更新。缺乏Oct4或Cdx2表达的小鼠胚胎仍分别形成ICM或TE[3-5]。这些结果表明，Oct4和Cdx2在囊胚形成后ICM和TE的分化中都发挥了作用。然而，关于Cdx2调节Oct4在牛胚胎中的作用，还未有统一的说法。Schiffmacher等[6]指出Cdx2在牛胚胎中负调节 Oct4。而其他研究表明，牛胚胎Cdx2的下调并不影响Oct4的表达[7-8]。目前对牛ICM和TE分化的分子机制研究有限。本研究希望通过Oct4和Cdx2敲低对牛ICM和TE分化相关基因表达的影响，解释Oct4和Cdx2在牛胚胎早期发育中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞

牛卵母细胞由本院研究室采集并培养。

1.1.2 主要试剂与仪器

QuantiTect反转录试剂盒购自 Qiagen公司；VECTASHIELD with DAPI防荧光萃灭封片剂购自Vector Labs；Oct4、Cdx2、β-actin 抗体购自 Santa Cruz Biotechnology；新生牛血清、RNA提取试剂盒购自生工生物工程有限公司。……