努色热提·阿布都沙拉木 袁慕云 林晓峰 许龙岩★ 陈瑶★

沙门菌（Salmonella，Sa）属于肠杆菌科，在世界各国细菌性食物中毒病例中，其引起的食物中毒常居榜首或第二位［1-2］。沙门氏菌的血清型有超过2 500 中，肠炎沙门菌（Salmonella enteritidis，SE）和鼠伤寒沙门菌（Salmonella typhimurium，ST）感染占到人类Sa 感染患者的75%以上［3-4］。因此，快速鉴定并确定沙门氏菌的型别，对食品安全具有重要的意义。

目前沙门氏菌的检测方法在快速发展中，聚合酶链式反应（PCR）等核酸检测技术的发展在一定程度上克服了传统检测方法耗时长、操作复杂、特异性差等缺点。但是目前用于PCR 的核酸检测参考品十分缺乏。要同时进行沙门氏菌的鉴定和型别分析，往往要使用多个基因组参考品才能完成，而基因组参考品中检测靶基因的量值，又难于确定和溯源［4-5］，也无法就不同实验室的检验结果进行对比和评价。为此，本实验拟制备含可用于鉴定和鉴别沙门氏菌型别的基因片段的质粒DNA 参考样品，为沙门氏菌核酸检测提供可溯源的有效参考物质，有效解决病原菌核酸检测能力快速发展与标准物质缺乏的矛盾。

1 材料与方法

1.1 实验材料与仪器

菌株来源为沙门氏菌标准菌株（CMCC50071），鼠伤寒沙门菌标准菌株（ATCC14028），肠炎沙门菌标准菌株（ATCC13076）（来自中国普通微生物菌种保藏管理中心广州海关技术中心）。全基因人工合成等（上海吉玛生物工程有限公司）；引物合成、DNA 测序（华大基因科技股份有限公司）。

1.2 片段设计和克隆

通过人工合成的方法将沙门氏菌aceA基因（GenBank：U43344.1），SE 特……