张雪溪

摘要：丙型肝炎的首个检测方法是丙肝病毒（HCV）检测法，经过多年发展，HCV检测方法有了极大的进步。本文分析总结多种检验技术，为加快HCV检验技术的发展提供参考。

关键词：丙型肝炎;临床检验;技术分析

【中图分类号】 R446.11    【文献标识码】 A      【文章编号】2107-2306（2021）17--01

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒感染引起的传染性疾病。HCV传染的途径较多，主要通过血液传播，但仍未能明确一半以上HCV患者的传染途径。HCV病毒感染的人数已经破亿，且不断的增加。由于乙肝病毒极易变异，尚未研制出专门有效的丙肝疫苗，因此，需要灵敏的检验技术，积极预防及早发现HCV感染，避免丙肝发病影响健康。

1抗-HCV检验技术

该技术是最早的HCV检测技术，可以详细划分为进行间接酶联免疫吸附实验、蛋白质芯片检测法、重组免疫印记法等，其中重组免疫印迹法因灵敏度较高，已成为抗体检测的标准。

当前抗-HCV检验技术可根据抗原类型和时间分为三代：第一代抗-丙型肝炎病毒IgG盒，该检测技术使用的是病毒基组非结构区，简称C100，该试剂由美国在1900年研发并公布。该技术的出现，降低了丙型肝炎病毒输血感染率，总体上降低80%的输血传染。但因其灵敏度低、检测时间长等缺陷，被二代抗-HCV试剂盒取代。第二代抗-HCV试剂盒是在原有基础上，增加新抗原，如肽C22-3和非结构区抗原C33C，抗-C22-3和抗-C33C。此种类型的抗-HCV检测技术能很快的检测出丙型肝炎病毒，而且有良好的特异性，增加的新抗原能提升HCV病毒检测率。第三代抗-HCV检验试剂盒，减少了核心区抗原比例，提升了非结构区的抗原比例，同时加入了NS5区抗原。

此种抗-HCV病毒检测技术仍然具有改进潜力。随着丙型肝炎研究的深化，发现了其他丙型肝炎病毒蛋白，通过加入外膜蛋白以提升检测灵敏度。此种检测方法制作简单，检测有效，有较大的推广价值。

蛋白质芯片是今年伴随基因芯片发展的新技术。该技术通过将蛋白质的分析微缩到小型芯片上，利用荧光或酶显色进行检测，用电脑分析结果。蛋白质芯片是将HCV混合抗原、核心区抗原、NS3、NS4、NS5区抗原分别固定在玻璃载体上，用样本稀释液将检测血清稀释10倍，加入蛋白微阵列反应孔中，37℃环境静置30分钟，洗涤后加入Cy3荧光标记的兔抗人IgG。加样检测后，玻璃片用激光共聚扫描仪扫描成型，对比同样处理的标准品，得出检测结果。此种方法具有较高的特异性和敏感性，具有高度扩充整合能力，但需要用较昂贵的激光扫描仪，增加了应用成本。

2丙肝病毒核酸（HCV-RNA）扩增检测技术

若患者感染丙型肝炎病已超过两周，则能在血清中检测到HCV-RNA。在感染完全恢复之前，血清中的HCV-RNA呈现第一个高峰，所以非常有必要应用丙肝病毒核算扩增检测技术。该技术按照常规PCR方式进行体外基因扩增，通过荧光探针与被扩增片段中的特异区域结合，当引物沿模板延伸至结合处时，荧光报告集团沿耐热DNA聚合酶的3～5′外切酶活性将探针切下来，即释放激光荧光。仪器根据实时检测到的数据和荧光化学合为一体，PCR扩增和产物分析的全过程在单管封闭条件下进行，减少产物污染和不能定量分析的问题，通过微机控制，实时进行动态检测扩增产物并自动分析结果，确保检测结果的准确。

因HCV-RNA在早期就会出现，并且HCV-RNA扩增检测技术具有非常高的灵敏性，可以用于早期诊断，降低丙型肝炎病毒感染的风险。在血清学指标不确定，无法得出准确结论时，可以运用该技术，增加了临床确诊的准确性。血清学方法只能检测该病原体的表型，无法明确诊断，而有些情况免疫学指标不能完全的反应病原体的感染状况，医院人员可以使用HCV-RNA扩增检测技术进行检测，查看患者是否存在病原体，为医生准确判断病人病情提供相应的准确数据。

病毒在样品中稳定性较差，血清在采集后应立即检测或快速冷冻，避免样品失活或分解，减少其他影响因素。一般HCV-RNA检测应用的是聚合酶链反应技术，该技术的检测灵敏度高，而且全自动定量测量。

3丙肝病毒抗原检测技术

丙肝病毒核心抗原蛋白中有191个氨基酸，其中氨基酸序列非常严格，与丙型肝炎病毒中的氨基酸序列相比，有95%以上是同源，这一现象完全可以作为丙型肝炎病毒感染的典型标志。通过检测丙型肝炎病毒抗原，有利于患者及早发现病情。

HCV病毒抗原检测分为以下两种：

一种是肝组织中HCV病毒抗原检测，以单克隆抗-HCV-N33直接酶標记法测定石蜡包埋肝组织中丙型肝炎病毒抗原，该抗体系应用于基因重组，表达丙肝抗原，具有简便、快速、稳定、特异性和灵敏性高的特点。但做肝脏穿刺对病人有一定损伤，难以推广。

另一种是血液中HCV核心抗原（HCV-cAg）检测，HCV核心抗原是HCV基因编码的结构蛋白质之一，其中21～61位氨基酸区域是高度保守免疫活性区。HCV-cAg是感染者体内最早出现的血清标志物，与HCV-RNA出现的时间相同。已知有两种检测HCV-cAg的双抗体夹心法ELISA试剂，一种是在抗体产生之前直接检测血清HCV游离核心抗原，另一种是在窗口期和抗体产生后的病毒复制期检测总HCV核心抗原。后者不受检测样品中的抗HCV抗体影响，检测结果准确可靠，可用于HCV血清学转换前的早期急性丙型肝炎的诊断。

HCV-cAg ELISA检测法具有较高的敏感度和精密度，不受其他疾病的影响，在感染初期即可检测出HCV-cAg缩短“窗口期”。它和HCV-RNA核酸检测技术具有较高的关联性，操作简便，敏感性好、特异性高、不需要特殊设备，费用低廉，具有较高的应用价值。

4结束语

综上所述，丙型肝炎病毒检测技术要遵守灵敏度高、准确、有效的原则。所有检测技术中抗-HCV病毒检测因制作成本低、具有普遍性，适用于一般检测。HCV-RNA核酸扩增检测因灵敏度高、测定时间长，适用于早期诊断和无法判断的情况，病情能有准确的判定。HCV-cAg检测因操作简便、灵敏度高，适用于急性丙型肝炎的诊断。HCV病毒检测技术的发展方向是做到迅速、准确、具有较高灵敏性;同时监测患者治疗和后期疗效观察。

参考文献：

[1]申明莉.丙型肝炎患者的临床检验研究[J].中国医药指南，2016，14（23）.

[2]唐翠.不同检验方法用于丙型肝炎检验临床对比[J].中国实用医药，2015，10（35）.