别自东，郭富英，穆彬，李溪

(1.山东医学高等专科学校附属费县人民医院心内科，山东 临沂 273400；2.宁夏医科大学总医院心脑血管病医院心内科，宁夏 银川 750000)

心肌梗死(myocardial infarction，MI)是一种缺血性心肌病，具有高发病率与高死亡率。MI能引起心肌损伤甚至心室重构，严重时可进展为心力衰竭，给人类的生命健康带来极大的威胁[1]。MI的发生过程中涉及多种因子的参与，其中microRNAs(miRNAs)是最重要的一类调控因子[2]。本科研小组前期研究[3]表明，在心肌细胞缺氧/复氧的过程中，miR-30a表达显著下调，自噬关键基因Beclin-1和LC3-II的表达增加；miR-30a的过表达抑制了Beclin-1和LC3-II的表达，从而增强心肌细胞在缺氧/复氧状态下的增殖活力，并减少凋亡。因此，miR-30a是调控心肌细胞功能的一个重要miRNA。另外，越来越多的研究[4]表明，环状RNAs(circular RNAs，circRNAs)在MI等多种心血管疾病中同样发挥重要的调控功能，有可能成为临床检测的特异标志物。同时，研究[5]发现，多数circRNAs能通过竞争性结合miRNAs而调控下游靶基因表达，进而影响机体的生物学功能。但到目前为止，关于与miR-30a相关的circRNAs的研究还未有报道。因此，本研究拟探讨与miR-30a相关的circRNAs在心肌细胞中的作用机制，为MI等心血管疾病的预防治疗提供靶点。

1 材料与方法

1.1 细胞培养

购自ScienCell研究实验室的人心肌细胞，用专用心肌细胞培养基进行培养，需加入1%心肌细胞生长添加物、5 %胎牛血清和1 %双抗(青链霉素混合液)。细胞置于37 ℃、含5% CO2培养箱中培养，隔天换液。用0.1 μM血管紧张素Ⅱ (Angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ)诱导细胞产生损伤模型。

1.2 双荧光素酶报告基因实验

将circ_SEC23A的序列克隆到双荧光素酶报告载体中得到野生型载体，继续将circ_SEC23A序列中的miR-30a结合位点进行突变得到突变型载体。……