唐春梅，赵海霞，随何欢，梁婧，朱丽莎，苏强

(1.川北医学院第二临床学院·南充市中心医院药学部；2.个体化药物治疗南充市重点实验室，四川 南充 637000)

心肌肥大是一种以心肌细胞增大而不增加心肌细胞数量为特征的心肌重构形式。病理性的心肌肥厚会导致心力衰竭乃至死亡[1]。microRNAs(miRNAs)是一类长度为20～22 个核苷酸的小非编码RNA，通过与靶基因mRNA 的不完全碱基配对，调控多达60%的蛋白编码基因[2]。众所周知，miRNAs通过靶向肥厚相关基因及信号通路参与心肌肥厚过程，因此，miRNAs在心肌肥大的预测和治疗中具有一定的应用前景[1]。Kaneto等[3]证实在左心室肥厚的高血压患者血清中miR-26b-5p均显著高于正常人，表明miR-26b-5p可能在高血压左心室肥厚的发病机制中发挥作用，并可能成为这种疾病新的生物标志物。体外细胞实验[4]表明miR-26b可抑制心肌细胞肥大；miR-26b在小鼠心肌肥厚模型的心肌中明显下调，过表达miR-26b可降低细胞自噬基因Beclin-1的表达和自噬标志物LC3-II/LC3-I的比值，抑制心肌细胞自噬反应，进而抑制心肌细胞肥大效应[5]。尽管目前已有研究证实miR-26b参与心肌肥大的过程，但其具体分子机制仍待继续研究探索。本文旨在研究miR-26b调控H9C2心肌细胞肥大的作用靶基因及分子机制。

1 材料和方法

1.1 主要材料

H9C2心肌细胞(ATCC,USA)；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS，Gibco，澳大利亚)；NC基因组、 miR-26b mimic、淋巴样增强因子1(Lymphoid Enhancer Factor 1，LEF1)siRNA(锐博，中国广州)；microRNA逆转录试剂盒、编码基因逆转录试剂盒、SYBR Premix Ex TaqII染料法荧光定量试剂盒(TaKaRa，JP)；心钠素(atrial natriuretic peptide，ANP)、β肌凝蛋白重链(Myosin heavy chain，β-MHC )、LEF1、GAPDH PCR引物(Invitrogen，USA)；miR-26b、U6 PCR引物(锐博，中国广州)；FITC-鬼笔环肽染色试剂盒(Sigma-Aldrich，USA)；Dual-Luciferase Report检测试剂盒(Promega ，USA)；……