赵婷，石琴

卵巢恶性肿瘤是全世界女性生殖器官最常见的恶性肿瘤之一，其发病率仅次于子宫颈癌和子宫内膜癌，但是死亡率居三大妇科恶性肿瘤之首。卵巢癌治疗主要采取肿瘤细胞减灭术联合以铂类为基础的化疗。其中，化疗耐药是卵巢癌高死亡率的重要原因之一。切除修复交叉互补基因1（Excision repair cross complementing group1，ERCC1）是铂类耐药最为关键的因子，也是目前研究较多的DNA修复基因之一。2018年1—12月，本研究构建了一种双重调控的新型肿瘤特异性增殖溶瘤腺病毒并以此为载体转染ERCC1小干扰RNA，来靶向杀灭卵巢癌细胞，进一步研究其灭瘤分子机制，并初步探讨其卵巢癌化疗增敏效果，以期研究出卵巢癌治疗及化疗辅助新方案。

1 资料与方法

1.1 主要试剂和设备

实验用质粒载体由上海吉凯基因公司实验构建并保存。正常的卵巢癌细胞系SKOV3 购自美国ATCC 公司，人胚胎肾细胞293t细胞株购自加拿大Microbix Biosystem 公司，DEME培养基、胎牛血清购自GIBCO BRL 公司，噻唑蓝（MTT）购自美国Genview 公司，RIPA 裂解液购自碧云天生物公司，磷酸酶抑制剂购自美国Sigma公司，二甲基亚砜（DMSO）购自上海试一化学试剂厂，DHanks 由上海吉凯基因技术有限公司配制，酶标仪购自Tecan infinite公司细胞凋亡试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司，ERCC1、β-actin、JAK2、STAT、PI3K、Akt 抗体皆购买于美国Abcam 公司，二抗为山羊抗兔IgG（H+L）、山羊抗小鼠IgG（H+L），均购自Thermo Pierce公司，ERCC1干扰序列（siRNA-ERCC1）、阴性对照序列均由上海吉凯基因有限公司设计合成。

1.2 方法

1.2.1 双调控腺病毒构建及鉴定 使用吉凯基因有限公司提供的pXC-1 载体进行改造，其E1a 基因上游插入了人端粒酶逆转录酶启动子（hTERT），E1b 基因上游插入了缺氧调控元件序列（HRE），于E1a 表达盒上游预留了酶切位点（具体结构模式图如图1）。……