杜波，高小丽，白雪梅

（榆林市中医医院 检验科，陕西 榆林 719000）

慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B, CHB）是全球性疾病，每年导致约100 万人死亡[1]。乙型肝炎病毒脱氧核糖酸（hepatitis B virus deoxyribonucleic acid,HBV-DNA）的载量水平、丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase, ALT）水平和组织学表现是HBV 治疗时应考虑的因素[2]。活动性病毒感染扫描是通过定量HBV-DNA 来检测的，但这种检测是基于分子的，而且费用昂贵，考虑到乙肝病毒的分布，特别是在发展中国家，一种廉价的实验室测试可以作为HBVDNA 分子检测的替代[3-4]。乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）是一种DNA 病毒，具有环状和部分双链的基因组，乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B surface antigen, HBsAg）是HBV 包膜上表面抗原，HBsAg 检测可作为乙型肝炎的初步诊断指标[5]。miRNA 对妊娠和肝损伤十分敏感，有研究指出可通过CHB 患者治疗前后血清microRNA-122（miR-122）变化预测干扰素的疗效[6]。本研究为进一步指导临床治疗CHB患者，对CHB 患者血清miR-122、HBV-DNA 载量及ALT 水平的相关性进行了分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月—2019年3月榆林市中医医院收治的200例CHB 患者作为研究对象。其中，男性121例，女性79例；年龄16 ～78 岁，平均（35.42±4.18）岁；病程1 ～18年，平均（9.17±2.45）年。纳入标准：①患者符合《慢性乙型肝炎防治指南》[7]中CHB 的诊断标准，并经过临床确诊；②年龄16 ～78 岁，病理、临床及随访资料完整；③纳入前均未接受过任何治疗；④本研究已通过医院伦理委员会批准，患者签署知情同意书。排除标准：①酒精、药物等导致的肝损伤患者；②其他器官严重病变患者；③存在资料缺失者；④肿瘤患者；⑤妊娠期或哺乳期妇女；⑥存在意识、精神障碍，无法进行语言沟通者。

1.2 方法

检测患者血清ALT 含量、miR-122 水平，分析HBV-DNA 载量与血清miR-122、ALT 含量的相关性。研究对象均取空腹肘静脉血5 ml，置于真空采血管中，3 000 r/min 离心3 min，分离血清保存至-80℃冰箱待检。采用RT-PCR 检测血清miR-122 水平和HBV-DNA，利用肝功能检测试剂盒检测ALT 含量，采用双抗体夹心法检测血清乙型肝炎e 抗原（hepatitis B e antigen, HBeAg）、乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen, HBsAg），ELISA 竞争法检测血清乙型肝炎e 抗体（hepatitis B e antibody, HBeAb）、乙型肝炎核心抗体（hepatitis B core antibody, HBcAb）和乙型肝炎表面抗体（hepatitis B surface antibody, HBsAb），所有操作严格按照试剂盒说明书进行。血清标志物结果：HBsAg ≥300 S/N为阳性，HBsAb＞10 mIU/ml 为阳性，HBeAg＞1.0 S/CO为阳性，HBeAb＜1.0 S/CO 为阳性，HBcAb＜1.0 S/CO 为阳性。依据血清标志物检测对照表进行分组。模式1：慢性肝炎患者；模式2：早期乙肝感染或慢性携带者；模式3：急性乙肝感染期或慢性乙肝表面抗原携带者；模式4：急性或慢性乙肝感染者；模式5：感染过乙肝病毒或急性乙肝病毒感染者；模式6：曾感染过乙肝病毒或处于急性感染恢复期；模式7：既往感染过乙肝，急性感染康复，HBeAb 浓度较低；模式8：既往感染过乙肝，具有保护性抗体；模式9：既往感染过乙肝，急性感染康复，具有保护性抗体；模式10：慢性乙肝表面抗原携带者或急性感染恢复期者；模式11：接种乙肝疫苗后，乙肝病毒感染已经康复且已产生免疫力者；模式12：急性乙肝恢复或慢性携带者[8]。ALT ≤40 u/L 定义为正常，ALT＞40 ～80 u/L 定义为轻度异常，ALT＞80 u/L 定义为异常。HBV-DNA 分组：HBV-DNA＜5.00×102copies/ml 作为低病毒载量组，HBV-DNA 在5.00×102～5.00×105copies/ml 作为中病毒载量组，HBV-DNA 在1×105～1×107copies/ml作为高病毒载量组，HBV-DNA＞1×107copies/ml 作为超高病毒载量组，分别有91例、46例、25例及38例。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 20.0 统计学软件。计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用方差分析，进一步的两两比较用LSD-t检验；计数资料以率（%）表示，比较用χ2检验；相关性分析用Pearson 法，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CHB 患者不同血清模式的ALT 和HBVDNA 载量比较

模式1、2、3和4中患者HBV-DNA载量比较，经方差分析，差异有统计学意义（F=24.820，P=0.000）；模式1、2 和3 的患者HBV-DNA 载量较模式4 患者高（P＜0.05）。各模式患者血清ALT 含量比较，经方差分析，差异有统计学意义（F=38.140，P=0.000）；模式1 的患者血清ALT 含量较其他模式患者高（P＜0.05）。见表1。

2.2 不同HBV-DNA 组患者血清ALT 阳性率比较

不同HBV-DNA 组患者血清ALT 阳性率比较，差异有统计学意义（χ2=16.124，P=0.000），低病毒载量组最低（P＜0.05）。见表2。

2.3 不同HBV-DNA 组患者miR-122 相对表达量比较

低病毒载量组、中病毒载量组、高病毒载量组和超高病毒载量组患者miR-122 相对表达量分别为（5.31±3.19）、（10.76±2.23）、（15.57±1.62）及（20.46±2.28），经方差分析，差异有统计学意义（F=37.240，P=0.000），miR-122 相对表达量随HBVDNA 载量增高而逐渐上升。

2.4 相关性分析

经Pearson 相关性分析，HBV-DNA 载量与ALT 和miR-122 均呈正相关（r=1.024 和0.946，P=0.027 和0.031）。

表1 CHB 患者不同血清模式的ALT 和HBV-DNA 载量比较

表2 不同HBV-DNA 组患者血清ALT 阳性率比较例（%）

3 讨论

CHB 是临床上常见的传染病，是感染HBV 所致，该病在我国发病率较高，为6%～10%，且呈不断上升的趋势[9]。目前，乙型肝炎已成为全球卫生政策的焦点。继2014年世界卫生大会通过关于病毒性肝炎的决议之后，该组织于2015年3月发布了关于CHB的指导方针以及2016年6月的“全球卫生部门病毒性肝炎战略”[10-11]。这些文件描述了到2030年消除病毒性肝炎对公众健康构成的威胁的目标，包括从2016年开始，将病毒性肝炎病死率降低65%，但目前只有不到1%的病毒性肝炎患者正在接受治疗[12-13]。主要原因为HBV 是CHB 的病原体，其症状和表现复杂，导致CHB 的准确诊断非常困难[14]。

HBV-DNA 是反映HBV 复制活跃程度及传染性的最直接指标，也是观察抗病毒药物疗效、预后和指导抗病毒药物应用的重要指标之一，HBV-DNA 定量的检测从根本上突破了免疫学方法等间接方法的局限性，通过直接检测病毒核酸水平，可真实的反映患者体内的病毒水平[15]。在本研究中模式1 ～4 患者均检测到HBV-DNA 载量，其中模式1、2 患者HBV-DNA载量最高，且4 种模式HBV-DNA 载量比较有差异；而在模式8 ～12 中，12例患者血清HBV-DNA 载量检测均为阴性，本研究结果说明单独检测HBV-M 载量容易出现假阴性或者假阳性，血清ALT 含量和血清HBV-DNA 载量的相关性与HBV-M 载量无关。与覃小梅等[16]研究中提到的HBV-M 对病毒复制、疗效观察帮助不大结果相似。

随着医疗技术的不断发展，临床上对于HBV 的诊断方法增多，比如HBV 基因检测、核酸检测等。HBV-DNA 是反映体内HBV 感染、复制和传染性强弱的标准，HBeAg 也是说明体内病毒复制的良好指标[17]。血清ALT 与肝细胞受损有直接关系，是体现肝细胞受损的直接指标。多指标联合检测更有助于CHB 的诊断[18]。在本研究中低病毒载量组患者ALT阳性最低，各病毒载量组患者ALT 阳性率有差异，HBV-DNA 载量与ALT 含量呈正相关，结果表明在一定范围内HBV-DNA 载量越高，HBV 感染复制率越高，ALT 阳性率越高，患者肝脏损伤加重。

miRNA 是非编码RNA 转录后调节靶基因，其不仅在细胞发育中、分化和生理功能中起着重要作用，而且在肿瘤、病毒感染和其他密切相关疾病的发展中也具有重要意义[19]。此外，miR 分子在某些疾病评估中越来越被认为是一种诊断和预后指标。有研究发现，miRNAs 可调节多种肝功能，报告了miRNAs 在与HBV 感染相关的肿瘤诊断中的作用[20]。miR-122 是肝脏中最丰富的miRNA 类型，miR-122 的变化不仅与CHB 的发病相关，而且与肝损伤相关[21]。在本研究中，miR-122 相对表达量随着HBV-DNA 载量增高而逐渐上升，与HBV-DNA 载量呈正相关，miR-122可抑制HBV 的复制，提示miR-122 可能与CHB 和肝癌的发生有关。

综上所述，CHB 患者血清miR-122 和HBV-DNA及肝功能之间存在一定相关性，三者联合检测可以相互补充，提高诊断的准确性，为临床诊治CHB 患者提供科学依据。