孔 昊,张 强,张 薇,刘伟文,曹成喜*,樊柳荫

(1.上海交通大学学生创新中心,上海 200240;2.上海交通大学生命科学技术学院,上海 200240;3.上海交通大学电子信息与电气工程学院,上海 200240)

辣根过氧化物酶(HRP)是一种重要的工具酶,被广泛用于开发基于酶联免疫吸附实验[1]、酶联适配体检测实验[2]以及其他基于酶催化反应[3]的生化检测方法。同时,纳米酶[4]、核酸过氧化物模拟酶[5]等具有HRP催化活性的物质亦被广泛地用于开发生化分析方法。因此,开发检测HRP的方法具有非常重要的意义。目前,HRP检测方法主要基于光学检测[1-5]以及电化学检测[6-8]等方法进行检测。这些方法依赖于昂贵、精密的仪器实现定量检测,对于实验环境、检测成本有着较高要求,难以用于即时检测,不易在条件受限地区推广应用。

电泳滴定(electrophoresis titration,ET)是一种基于移动反应界面原理的可视化检测方法,最初被用来对食品中蛋白质总量进行特异性检测[9,10]。近年来,随着检测模型以及芯片技术的开发,电泳滴定摆脱了传统电泳装置,实现了芯片化,并已成功用于乳制品中三聚氰胺及尿液中疾病标志物的现场检测[11,12]。本文在上述研究基础上,对隐色结晶紫(LCV)显色体系与3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)显色体系在HRP催化显色过程中的显色效率进行了比较,以TMB显色体系建立了基于氧化还原反应界面移动距离的可视化定量测定HRP的方法。该方法直观、简单、操作成本低,不需要光学检测设备即可实现HRP的裸眼检测,对于具有HRP活性的物质进行酶活测定或基于酶反应的生物标志物的检测具有潜在的应用价值。……