谢赛飞 谭劲 郑玲 朱可可 周领航 陈明

〔摘要〕 目的 探索扶正活血解毒方對槟榔碱提取物（areca nut extract， ANE）诱导的口腔黏膜下纤维化（oral submucous fibrosis， OSF）Wnt/β-catenin 信号通路的作用机制。方法 体外培养大鼠口腔黏膜上皮细胞（epithelial cell， EC），分为正常组、模型组、中药高/中/低剂量组和IWR-1组。以ANE为诱导剂，扶正活血解毒方含药血清为干预药物，以Wnt/β-catenin信号通路抑制剂IWR-1为阳性对照物，采用CCK8检测EC细胞增殖;PCR检测Wnt1、β-catenin、Axin、cylinD1基因的表达;Western blot检测Wnt1、β-catenin、Axin、cylinD1蛋白的表达。结果 与正常组相比，模型组EC增殖水平提高，Wnt1、β-catenin、cylinD1基因及蛋白表达增加，Axin基因及蛋白表达降低（P<0.05）;与模型组相比，中药高、中剂量组EC增殖水平降低，Wnt1、β-catenin、cylinD1基因及蛋白表达降低，Axin基因及蛋白表达升高（P<0.05）;与模型组相比，IWR-1组EC增殖水平降低，Wnt1、β-catenin、cylinD1基因及蛋白表达降低，Axin基因及蛋白表达升高（P<0.05）。结论 扶正活血解毒方可通过调控Wnt/β-catenin信号通路，抑制ANE刺激的EC增殖，逆转OSF癌前病变的形成。

〔关键词〕 口腔黏膜下纤维化;槟榔碱提取物;扶正活血解毒;Wnt/β-catenin信号通路

〔中图分类号〕R285.5        〔文献标志码〕A       〔文章编号〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2020.11.001

〔Abstract〕 Objective To explore the mechanism of Fuzheng Huoxue Jiedu Prescription on Wnt/β-catenin signaling pathway induced by areca nut extract （ANE） in oral submucosal fibrosis. Methods The rat oral mucosa epithelial cells （ECs） cultured in vitro were assigned into a normal group， a model group， a Chinese materia medica high， medium and low dose group， a IWR-1 group. ANE was inducer， and Fuzheng Huoxue Jiedu Prescription-containing serum was intervention medicine. Wnt/β-catenin signaling pathway inhibitor IWR-1 was the positive control medicine. The CCK8 was used to test EC cell proliferation; PCR was used to detect Wnt1， β- catenin， Axin， cylinD1 gene expression; Western Blot was used to detect Wnt1， β-catenin， Axin， cylinD1 protein expression. Results Compared with the normal group， ECs proliferation levels of the model group increased， and Wnt1， β-catenin， cylinD1 gene and protein expression increased. Axin gene and protein expression decreased （P<0.05）; Compared with model group， ECs proliferation levels of Chinese materia medica high and medium dose groups were reduced， and Wnt1， β-catenin， cylinD1 gene and protein expression were reduced. Axin gene and protein expression increased （P<0.05）; Compared with the model group， ECs proliferation level of the IWR-1 group was reduced， and Wnt1， β-catenin， cylinD1 gene and protein expression were reduced. Axin gene and protein expression increased （P<0.05）. Conclusion Fuzheng Huoxue Jiedu Prescription can inhibit the proliferation of EC cells stimulated by ANE， and reverse the formation of OSF precancerous lesions through regulating Wnt/β-catenin signaling pathway.

〔Keywords〕 oral submucosal fibrosis; areca nut extract; Fuzheng Huoxue Jiedu; Wnt/β-catenin signal pathway

口腔黏膜下纤维化或称口腔黏膜下纤维性变（oral submucous fibrosis， OSF）是一种口腔黏膜潜在恶性疾病[1-2]。其癌变率高达7%，WHO将OSF列为癌前状态[3]。流行病学调查表明，咀嚼槟榔是OSF主要的致病因素，但癌变机制尚不清楚，可能与槟榔的致癌成分槟榔碱、细胞因子、创伤及细胞免疫等关系密切[4-5]，尤其认为某些细胞因子参与了OSF的癌变过程，其中以Wnt与TGF-β1介导的信号通路最具代表性[6-8]。如何阻断TGF-β与Wnt信号通路细胞因子间的联系，将成为防治OSF癌变的关键。前期研究发现扶正活血解毒中药通过调控TGF-β1/Smads信号转导通路能具有抑制槟榔碱提取物（areca nut extract， ANE）刺激的EC细胞增殖的作用[9-11]。本研究将从Wnt/β-catenin信号转导通路的角度探讨扶正活血解毒方对OSF癌前病变的作用机制，为临床OSF癌变的防治提供新的实验依据。

1 材料与方法

1.1  材料

1.1.1  实验细胞  口腔黏膜上皮细胞（epithelial cell， EC）购自于中国上海赛百慷生物技术股份有限公司。……