刘芳歆 秦剑平 郭小军 李增辉 杨超超 吴仪凡 艾需 宋晓越,3*

（1，陕西省神木市畜牧兽医技术推广站 719300；2，榆林学院 719000；3，陕西省“四主体一联合”肉羊工程技术校企联合研究中心 719300）

1 胚胎移植概述

动物胚胎移植（Embryo Transfer,ET）是采用超数排卵技术促使优良生产性能的母畜大量排卵，通过配种获得早期胚胎，再将早期胚胎分别移植入其它母畜子宫内的技术。其目标是对优良生产性能个体的快速扩繁，从而提高生产效率，满足市场需要，增加养殖收入。

目前，羊等家畜的胚胎移植技术已经达到了商业化的应用水平，同时，还带动了相关的胚胎工程、品系培育等方面的技术发展，对推动我国畜牧业的高效发展提供了有力的技术支持。

2 羊胚胎移植的操作方法

2.1 供、受体羊及试情种公羊的选择

2.1.1 供体羊的选择

选择品种优良、生产性能好、具有较高的经济价值的成年种羊作为供体羊。具体要求其系谱清楚、遗传性能稳定、繁殖性能好、没有疾病。

供体母羊选择2.5～6 岁以内的最为合适，应具有详细的产羔记录以供参考，应保证至少经过两个以上正常发情周期，并且其产羔在60d 以上。

供体公羊应完成精液质量的检测与评定，应选取精液品质好（精子活率高，精液浓度大）、遗传性能稳定、没有疾病的公羊。

2.1.2 受体羊的选择受体母羊应选择经济价值较低、但发情周期、繁殖性能及营养状况正常的经产母羊。

2.1.3 试情公羊的选择

应当选择健康、体格强壮、性欲旺盛的成年公羊。在试情时对公羊应当配戴试情布，或通过手术法使其阴茎偏离，以避免发生自主交配。

2.2 同期发情

同期发情技术，又称同步发情，指利用激素控制和调节母畜集中发情。

2.2.1 同期发情的机理

羊的发情周期可划分为卵泡期和黄体期。当黄体发生退化后，孕酮的含量明显下降，然后卵泡会迅速发育，并最终成熟，完成排卵。如果用合成激素制剂代替母羊体内激素在发情周期中的作用，就会针对性地对发情过程进行控制，从而使多个母羊的发情周期保持一致。

2.2.2 药物选择

目前用于羊同期发情的药物有两类，一是孕激素类，属于延长黄体期的药物，常见的有孕酮、甲孕酮等，能抑制卵泡的生长。另一类药物是缩短黄体期的，例如前列腺素（PG），用于降低孕激素水平，使母畜进入卵泡期，提前发情。

2.2.3 同期发情技术流程

羊的同期发情一般使用孕酮栓结合孕马血清促性腺激素（PMSG）的方法。首先，将孕酮海绵栓植入母羊阴道，12～14天后取出，然后肌肉注射300～350IU 的PMSG、以及1ml 的卵泡刺激素（FSH），72h 后发情率能达到85%。

2.3 超数排卵

利用外源性促性腺激素诱导多卵泡同时发育，排出多个卵母细胞的方法称为超数排卵，简称超排。

2.3.1 超数排卵机理

正常状态下的母羊卵巢上有大量的有腔卵泡，由于FSH 含量的不足会导致其退化，只有少数卵泡能发育成熟并排卵。因此，如果使母羊体内外源性的促卵泡激素水平增加，能促进有腔卵泡的发育成熟，并大量排卵。

2.3.2 超数排卵方案

一般在发情周期的第11～13 天注射600～1100 单位的PMSG，出现发情后开始配种，并注射500～750 单位的人绒毛膜促性腺激素（HCG）。

2.4 胚胎回收

2.4.1 胚胎回收技术

将早期胚胎在特定时间从供体子宫或输卵管内取出的过程，称为胚胎回收。冲胚方法包括：输卵管冲胚法（在供体羊配种后2～3d 冲胚）、子宫角冲胚法（供体羊发情后6～8d 冲胚）。但输卵管冲胚法易导致输卵管和伞部粘连，影响母羊繁殖，因此，最常用的为子宫角冲胚。胚胎的回收过程要特别注意减少对供体母羊的损伤，促进供体母羊快速恢复[1]。

2.4.2 胚胎评定

依据显微镜下胚胎的细胞形态、透明带的完整性、发育的阶段以及细胞在透明带中的占比综合确定胚胎等级。一般将胚胎可分A、B、C、D 四个等级。正常的胚胎有卵裂球，其外形整齐、清晰，在分布上较均匀、紧密、大小一致，同时，发育情况应当和胚胎日龄一致。

2.4.3 胚胎移植

选择与供体母羊同步发情的受体母羊进行胚胎移植。将回收的高品质胚胎移植到其黄体侧子宫角，依据受体母羊黄体的具体情况可移植1～2 枚胚胎。一般取A 级胚胎用于移植。

2.4.4 术后护理

术后应逐步恢复手术羊只的采食量，手术当天应饲喂优质饲草，从术后第2 天起添加少量精饲料，第3 天可进行正常饲喂。

2.4.5 妊娠鉴定

术后应及时开展妊娠鉴定工作，减少空怀母羊数量，保证经济效益的最大化。可采用B 超仪在胚胎移植后45～50d 诊断是否妊娠。对已妊娠母羊应加强饲养管理，最好采用分圈饲养，为生产羔羊做好准备[2]。

3 影响胚胎移植效率的因素

3.1 品种及个体差异

研究发现，绵羊的超排效果普遍比山羊差，而不同绵羊品种间的超排效果差异也较大，同时，一个品种内个体间的超排差异也较大。唐大伟[3]等的研究表明，陶赛特的超排效果与萨福克、德克赛尔羊相比较好，平均可达8.36 枚。

3.2 激素作用

目前，超排常用激素是FSH 和PMSG。其中，PMSG 的效果较平缓，卵巢体积不会剧烈的增大，易恢复正常，排卵率较高。但其半衰期长，容易导致大卵泡和卵巢囊肿，引发雌激素水平升高，从而对卵子成熟、受精和胚胎发育有负面影响。

3.3 手术影响

如果供体母羊多次被利用，由于手术损伤、出血等因素会造成生殖道粘连，影响超排效果。研究表明，用PMSG 对同一母羊重复超排会使降低卵巢的反应，所发育的卵泡数和排卵数也将下降，甚至导致不产生成熟卵泡或不排卵。虽然FSH 没有发现此缺点，但两次超排间应隔几个情期，若能在中间妊娠一次更好，从而可有效消除生殖器官粘连等问题。在胚胎移植手术方式的选择上，腹腔镜输精不通过子宫颈，而直接输入至子宫角，虽然输精量少，但受精率高，因此，应当通过运用有效的技术手段，避免胚胎移植术后发生粘连，并提高供体和受体母羊的利用率，从而提高胚胎移植的效率。

3.4 环境及营养水平

研究发现，绵羊的繁殖对季节有较高依赖性，秋季是绵羊最佳繁殖季节，因此，在秋季安排胚胎移植的效果较好，其妊娠率较高。

另外，供体母羊的营养状况也对超排和移植成功率有一定影响，特别是超排前后的营养水平，对发情、排卵和受精作用都有比较显著的影响。

4 总结

胚胎移植技术是现代生物技术中重要的一项应用技术，已日趋成熟。该技术能扩繁优良种畜，减少生产成本，增加双胎率，充分发挥优良个体的遗传和繁殖潜力，对畜牧业的发展有重大意义。目前，体外生产胚胎的商业化应用也在逐步提高，有力的推动着我国畜牧业的快速发展，前景广阔。