邓敏 陆青

(上海市医疗器械检测所，上海 201318)

不同厂商的不同检测系统，即使声称各自具有溯源性，但其检测结果间的差异一直给临床医生及患者带来很大的困惑，甚至会引发医疗纠纷[1]。为探索当前市场上低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的检测现状，探讨不同测量系统检测结果之间的一致性，选取市售的10个厂商生产的低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)检测系统，尝试以同一血清基质校准品替代原厂配套校准品，检测国家标准物质及国际参考物质，观察各测量系统结果相对偏移及离散情况的变化。

1 材料和方法

1.1 试剂与仪器

低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒分别来自10家国产厂商（以下简称A、B、C、D、E、F、G、H、I、J），均为直接法-表面活性剂清除法。7100型全自动生化分析仪（日本日立公司）。

1.2 样品

血清总胆固醇、总甘油、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇（冰冻）标准物质，证书编 号：GBW09179b，LDL-C量 值：2.478mmol/L，不确定度：0.053mmol/L；国际参考物质(standard reference material,SRM) 1951c （美国标准物质研究院研制），LevelⅠLDL-C量值：86.4±1.4mg/dL(2.23±0.04mmol/L)，LevelⅡLDL-C量值：143.8±2.1mg/dL (3.72±0.05mmol/L)。

1.3 校准品及质控物质

A厂商自带校准品（批号：20200416）、B厂商自带校准品（批号：00303B12）、C厂商自带校准品(批号：ZL9103B)、E厂商自带校准品（批号：190301）、H厂商自带校准品(批号：20CA)、J厂商自带校准品(批号：19113007)。血清基质校准品（英国朗道公司，批号：2655CH）。质控物质（英国朗道公司，多项质控品水平2、水平3，批号：2622CH、2623CH）。厂商校准品及质控品为冻干粉末的，均按说明书要求复溶，复溶后分装并避光保存至-75℃。测量前30min从-75℃取出，室温融解，样本处理过程注意避免反复冻融。

1.4 实验方法

实验前对日立7100全自动生化分析仪进行常规维护与保养，按照每个试剂盒说明书规定的相应参数进行设置与校准，以质控品为样本进行检测，计算每个系统检测结果的精密度，在结果符合行业标准要求的前提下，进行后续检测。

日立7100全自动生化分析仪分别与10个试剂盒配套组成检测系统。用下述2种方法校准后，分别检测国家标准物质GBW09179b、国际参考物质SRM1951c Level Ⅰ/Ⅱ，每个样本重复检测3次。两种校准方法如下：

校准方法1：按照各试剂厂商声明的配套校准品进行校准。其中A、B、C、E、H、J试剂使用厂商自带配套校准品进行校准，D、F、G、I试剂使用血清基质校准品进行校准。

校准方法2：所有试剂均使用血清基质校准品进行校准。

1.5 数据统计学方法

分别计算检测结果与国家、国际标准物质标示靶值的相对偏移及不同检测系统检测结果的离散情况，以变异系数（CV）表示。相对偏移（B）使用公式计算：B=[(X-T)/T]×100%，X为3次结果均值，T为标准物质靶值。采用Minitab 17及Excel 2016软件进行统计及绘图。相对偏移以≤1/2CLIA' 88允许误差（TEa%）为临床可接受水平。

2 结果

2.1 测定国家标准物质GBW09179b

使用校准方法1校准后，测定国家标准物质GBW09179b，各检测系统所得结果的相对偏移范围在-11.08%～+11.11%，10组检测结果的变异系数为6.95%。使用校准方法2校准，各检测系统所得结果的相对偏移范围明显缩小，范围降至+1.29%～+6.94%，10组检测结果的变异系数有显著降低，降至1.61%。不同检测系统，经两种校准方法校准，所得结果相对偏移均符合临床要求。各检测系统结果见表1及图1。

2.2 测定国际标准物质SRM1951c Level Ⅰ/Ⅱ

经校准方法1校准，测定SRM1951c LevelⅠ/Ⅱ。各检测系统所得结果的相对偏移范围分别为-10.16%～+20.63%及-12.46%～+21.24%，结果相对偏移临床符合率均为90%。10组检测结果的变异系数分别为8.73%及10.12%。使用校准方法2校准，总体相对偏移范围略有缩小，相对偏移范围为+8.52%～+16.89%及-3.76%～+17.92%，结果相对偏移临床符合率为50%及60%。10组测量结果的变异系数有较为明显的缩小，分别由8.73%降低至2.85%，10.12%降低至6.18%。各检测系统结果见表1及图1。

3 讨论

目前国内仪器、试剂产品众多，各自构成自建的检测系统，同样产品虽溯源至相同参考物质，但仍可发现其检验结果可比性差，无法实现检验结果的互认[2]。研究中10个国产低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒虽均溯源至国家或国际两种参考物质，但测定参考物质的结果仍存在一定差异。经其配套校准品校准后，溯源至国家标准物质的7个检测系统(B、C、D、E、F、G、I)，测量国家标准物质，所得相对偏移结果不超过±6.00%。其余3个溯源至国际参考物质的检测系统，测量国际标准物质，Ⅰ检测系统的相对偏移为-2.09%及-3.05%，A检测系统的相对偏移为-10.16%及-12.46%，H检测系统的相对偏移为+20.63%及+21.24%。由于各检测系统间结果一致性较差，离散度（变异系数）较高，故研究尝试选用同一血清基质校准品替代各检测系统中配套校准品，准确性（偏移）及检测系统间结果离散度均有一定改善。当然，每种检测系统都应有其配套的校准品[3]，采用统一血清基质校准品校准各检测系统并非正规溯源的方式，但从结果分析中可以看出,影响各检测系统间结果的一致性较差的原因并不是试剂组分的质量问题，而是因为各检测系统配套校准品的在量值溯源、互换性或生产制备工艺方面尚存在问题。检测过程中，使用具有量值溯源性和互换性的校准品，可大幅度提高检测结果的准确性与一致性[4]。

图1 不同检测系统对参考物质的检测结果偏移及离散图

量值溯源是实现临床实验室不同测量系统测量结果准确可比的前提，但通过可溯源到相同标准物质的测量系统获得的检验结果也未必具有可比性[5]。因为在校准品量值溯源及传递过程中存在诸多影响因素，如所溯源一级校准物质的选择（涉及赋值量值的来源及一致性），溯源过程中所产生的不确定度，量值传递过程中样本基质的互换性评价，量值传递方式的选择，包括直接赋值法及比对法（涉及样本量、统计计算方法、参考检测系统的选择）及对溯源结果的评价标准等。故产品生产过程中，厂商应当建立校准品、参考品量值溯源程序，并对生产的每批校准品、参考品进行赋值，校准品的量值传递对体外诊断试剂的检测准确性的影响是毋庸置疑的[6]。量值传递的方式有多种，使用标准物质是量值传递的主要方式之一，但由于适合的、可直接用于方法校准、且具有互换性的参考物质不易购买且价格昂贵，故建议可使用经参考测量程序赋值的人血清作为建立溯源性的二级参考物质[7]。目前，相当一部分校准品厂家会选择溯源链的终端为制造商选定的测量程序，即便已经有国际约定的参考物质或参考方法。厂家是从可获得性和成本方面考虑，但从量值传递本身而言，却会带进更多系统和操作因素的影响，不利于赋值和不确定度的评定。因此，为保证校准品量值的准确性和互换性，应尽可能溯源至最高计量级别[8]。

在2015年检验医学溯源联合委员会(JCTLM)年会上，国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)互换性工作组研究报告中指出厂家系统必须使用有互换性的校准品来确保相同样品在不同的厂家测量系统测量时得到一致的检验结果[5]。有些校准品是血清基质的，但其中添加了防腐剂或经过其他处理步骤，使校准品与新鲜患者血清的互换性出现问题[4]。校准品及示值的来源也是影响标准物质互换性评价的关键问题之一，研究选用厂商中有4个不同厂家的常规方法试剂采用相同校准品，这些都有可能影响校准品互换性评价结果[9]。校准品的浓度水平过低或过高也会影响互换性评价结果[10]。此外，校准品的不确定度也是影响互换性结果的另一个重要因素，是衡量校准品赋值可靠性的定量指标，制定科学有效的方法计算校准品不确定度是关系到患者检测结果准确性的关键因素之一[6]。

研究发现，用测量系统配套校准品校准后，多个检测系统GBW09179b检测结果的相对偏移远低于SRM1951c检测结果的相对偏移，且改变校准方法后，现象依旧存在。分析原因，可能是由于SRM1951c与GBW09179b两种标准物质在互换性上存在一定差异所造成的。GBW09179b是采用我国候选参考方法超速离心/HPLC法计算LDL-C的测定值及测量不确定度的冷冻血清参考物质,测定结果可溯源至国际SI单位[11]。SRM1951c是国际认可的美国疾病预防和控制中心(CDC)β定量参考法赋值的冷冻血清参考物质。标准物质是否可用于常规测量系统，取决于两个方面的特性，一是量值的准确可靠性，二是在不同测量系统上的互换性[12]。标准物质的互换性是指对于给定标准物质的规定量，由两个给定测量程序所得测量结果之间关系与另一类指定物质(通常是天然样本)所得测量结果之间关系的一致程度表示的标准物质的特性[13]。

血脂水平一直是临床关注的重点之一，只有准确评估患者的血脂水平，才能确切地识别个体心血管事件风险，这在一定程度上依赖于准确可靠的血脂检测结果[14]。针对研究中发现的问题，建议各生产厂商在保证产品质量的前提下，规范使用国家、国际标准物质，运行标准程序，通过学习国际、国内溯源相关标准及指南文件，不断完善及确保量值溯源及传递的准确性，同时充分考虑校准品的互换性评价及不确定度评定。企业也可积极参与临床实验室的室间质评工作，验证产品检测结果的准确度。制备经参考测量程序赋值的人血清作为二级参考物质也是提高各厂家校准品可比性的有效方法。通过不断完善及规范参考物质及校准品的制备及使用，可以有效降低体外诊断试剂的各类风险，进而促进我国体外诊断试剂行业的健康发展。