丁秋芸，孙国君，孙建政，王晓娜，库倩倩，张金生

（1石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832000；2沙湾县畜牧兽医局，新疆 沙湾 835600）

0 引言

松针富含氨基酸、微量元素、维生素等营养物质，及黄酮、有机酸、精油等活性物质，用作饲料对家禽和猪的生长发育、免疫力和生殖功能改善等均有促进作用[1]。然而，迄今国内外对松针在反刍动物生产上的应用研究报道较少，且主要集中于其对动物生长性能和采食量的影响上，对动物是否会产生毒副作用研究较少。已有研究表明，给妊娠后期奶牛饲喂松针可引起流产，而对绵羊和山羊却没有影响[2]。同时，松针中含有酚类物质、萜烯和单宁等次级代谢产物，在饲料中的水平和饲料养分消化率呈负相关[3]，酚类物质对瘤胃微生物可产生负面影响[4]，表明日粮中松针水平过高可影响反刍动物日粮养分的消化率。利用松针含有的杀菌、抑菌活性物质，已成功制作松针和苜蓿混合青贮饲料[5-6]。但饲喂松针和苜蓿混合青贮是否影响反刍动物体内代谢及日粮养分消化率，目前尚不明确。为此，本试验以哈萨克羔羊为试验动物，在育肥羔羊日粮中加入不同比例松针与苜蓿混合青贮饲料，研究松针与苜蓿混合青贮对育肥羔羊血液生化指标和日粮养分消化率的影响，为其在羔羊生产上的应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验时间和试验地点

试验于2019 年9 月至2019 年11 月新疆沙湾县肉羊育肥场进行。试验期75d，其中预饲期15d，正试期60d。

1.2 试验设计

本试验采用单因子试验设计。选择50 只体质健康、体重相近（35.31±1.49kg）的哈萨克公羔羊（4月龄断奶），随机分为5 组，即试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组，每组10只羔羊，共5个处理，每个处理2个重复，每个重复5 只羔羊。以干物质为基础，日粮精粗比为50∶50，粗饲料中小麦秸秆占30%，青贮饲料占70%，青贮饲料由10%玉米与苜蓿混合青贮和30%松针与苜蓿混合青贮2 种混合青贮组成。以鲜重计，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组青贮饲料中，30%松针与苜蓿混合青贮所占比例分别为0、1/6、1/3、2/3、1，则各试验组青贮饲料松针所占比例分别为0、5%、10%、20%和30%。

1.3 青贮饲料的制作

玉米、松针与苜蓿混合青贮饲料于2019 年6 月制作，原料为第一茬苜蓿鲜草、樟子松松针和玉米粉。将苜蓿鲜草切短至2～3cm，按苜蓿青草鲜重计，在苜蓿鲜草青贮中分别添加10%玉米和30%的樟子松松针，制作成2种混合青贮饲料。混合均匀，装填于300L 青贮罐中，压实、密封，贮存。饲喂前，将2 种苜蓿青贮按比例混合饲喂。2 种混合青贮饲料营养成分见表1，饲料消化能（DE）估测模型为DE（MJ/kg）＝17.211－0.135NDF[7]。

1.4 试验日粮

参照中国《肉羊饲养标准》[8]（NY/T 816-2004）35kg体重，平均日增重为200g/d的育肥羊营养需要量，及《绵羊用精饲料》[9]（GB/T 20807-2006）设计日粮配方。日粮配方及营养水平见表2。

1.5 饲养管理

试验羊采用舍饲地面平养，人工饲喂。试验前对试验羔羊进行驱虫、消毒及编号等操作。试验期内对圈舍进行定期消毒。每天9:00 和18:00 定时饲喂，先粗料后精料，自由饮水，每周记录1 次饲料添加量和剩料量。

1.6 测定指标及方法

表1 混合青贮饲料营养成分（DM basis）Table 1 Nutritional components of mixed silage（DM basis）

表2 基础日粮组成及营养水平（干物质基础）Table 2 Composition and nutrient levels of basal diet（DM basis）

1.6.1 血液生化指标测定

在饲养试验结束后，每组羔羊颈静脉采血，每只羔羊分别用抗凝真空管和普通真空管采集血液，用于全血和血清成分分析。将普通真空管采集的血液于室温下静置30min 后，3000r/min 离心10min，收集血清并分装于1.5mL 离心管中，-20℃冷冻保存，备用。

血液血红蛋白含量采用半自动生化分析仪（RT-1904C型，上海）测定。

血清总蛋白、白蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、血清尿素氮及肌酐含量，采用试剂盒法测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.6.2 日粮养分消化率测定

粪样采集与制备：在试验期最后3d，每组随机选取3 只羔羊，采用全收粪法收集粪样。每天称取每只的排粪量，每天取每只羊总粪样的20%，并将3d 的粪样单独混合，取总量的1/10 加入10%的H2SO4，一般按每100g 鲜粪样加10%的H2SO4溶液20mL 进行处理，用于测定粗蛋白，再取1/10 不加H2SO4，将粪样置于65℃烘箱中制成半干样，消化试验结束后，将3d累积粪样混合、粉碎，过40目网筛，制成分析样本，备测。

饲料样品采集与制备：按四分法收集精料料样，青贮饲料在烘箱中65℃烘干制成风干样，粉碎后备用。

参照《饲料分析及饲料质量检测技术》[10]，测定饲料及粪样中干物质（DM）、粗蛋白质（CP）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）、钙（Ca）、磷（P）含量。其中干物质含量采用烘箱烘干法测定，粗蛋白质含量采用凯氏定氮法测定；中性洗涤纤维含量、酸性洗涤纤维含量采用范式法测定；钙含量采用高锰酸钾法测定；磷含量采用比色法测定。

养分消化率（%）＝（食入养分量－粪中养分量）÷食入养分量×100%

1.7 数据的统计分析

试验数据采用SPSS11.5 统计软件中的ANOVA对试验数据进行单因子方差分析，Duncan氏法进行多重比较，试验数据用平均数±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 松针与苜蓿混合青贮对育肥羔羊血液生化指标的影响

由表3 可知，5 个试验组间的的血清总蛋白、白蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、肌酐、尿素氮含量，以及血液血红蛋白含量均无显著差异（P＞0.05）。

2.2 松针与苜蓿混合青贮对育肥羔羊日粮养分消化率的影响

由表4可知，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组间日粮干物质消化率无显著差异（P＞0.05），试验Ⅰ、Ⅱ组显著高于试验Ⅴ组（P＜0.05），试验Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组间无显著差异（P＞0.05）；试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组间的日粮粗蛋白质消化率无显著差异（P＞0.05），试验Ⅰ组显著高于试验Ⅴ组（P＜0.05），试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组间无显著性差异（P＞0.05）；试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组间中性洗涤纤维消化率无显著差异（P＞0.05），试验Ⅰ、Ⅱ组明显高于试验Ⅴ组（P＜0.05），试验Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组间无显著差异（P＞0.05）；试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组间酸性洗涤纤维消化率无显著差异（P＞0.05），试验Ⅰ组显著高于Ⅳ、Ⅴ组（P＜0.05），试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组间无显著性差异（P＞0.05）。随着松针添加量的增加育肥羔羊对钙、磷的消化率呈下降趋势，但各组间钙、磷消化率无显著差异（P＞0.05）。

3 讨论

表3 松针与苜蓿混合青贮对羔羊血液生化指标的的影响Table 3 Influenc of pine needles and alfalfa mixed silage on blood biochemical index of lambs

表4 松针与苜蓿混合青贮对羔羊日粮养分消化率的影响Table 4 Influenc of pine needles and alfalfa mixed silage on the dietary nutrient digestibility for lambs

3.1 松针与苜蓿混合青贮对育肥羔羊血液生化指标的影响

血清总蛋白由白蛋白和球蛋白组成，有维持血浆正常胶体渗透压、运输脂肪酸和胆红素、维持血浆PH值恒定等作用[11]，血清总蛋白水平的高低能直接反映机体的代谢状况和免疫水平。谷草转氨酶和谷丙转氨酶主要分布在肝细胞浆，两者是常用的体现肝脏功能的指标。谷丙转氨酶是肝脏高度特异性酶，肝损伤时，谷丙转氨酶释放到血液中，血清中酶活性升高。谷草转氨酶为器官中度特异性酶，谷草转氨酶的活性升高见于肝炎急性期及药物中毒性肝细胞坏死等[12]。肌酐是蛋白质的代谢产物，大部分由肾脏随尿排出。肾功能不全时，肌酐在体内蓄积过量便成为有害的毒素，影响消化系统和呼吸系统等代谢[13]。血清尿素氮是动物体内蛋白质代谢的主要终产物，血清中尿素氮浓度可以准确反映动物体内蛋白质代谢和氨基酸平衡状况，尿素氮上升表明机体蛋白代谢或氨基酸平衡状况异常。血红蛋白是红细胞内含有的一种特殊的蛋白质，主要功能是运输氧气和二氧化碳，可反映贫血的程度。现有文献表明，绵羊血清指标正常值范围为总蛋白62.1～70.0g·L-1、白蛋白37.1～43.7g·L-1、谷草转氨酶40.0～123.0U·L-1、谷丙转氨酶25.0～70.0U·L-1、肌 酐61.8～265.2μmol·L-1、血 清 尿 素 氮5.4～12.9mmol·L-1。血液血红蛋白含量正常值范围为80～160g·L-1[14]。本试验结果显示，不同比例松针与苜蓿混合青贮对育肥羔羊血液生化指标无显著影响，且均在正常值范围内。证明饲喂松针与苜蓿混合青贮没有损伤育肥羔羊肝、肾功能，对体内蛋白质代谢无影响，这与熊筱娟等[15]（1989）报道，松针煎液没有影响家兔的生长、血象及肝、肾功能，对心、肝、脾、胃、肾组织也无病理改变的研究结果相似，进一步证明松针毒性极低，可作为饲料资源开发利用。

3.2 松针与苜蓿混合青贮对育肥羔羊日粮养分消化率的影响

在本试验日粮条件下，育肥羔羊日粮干物质、粗蛋白质、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的消化率随着混合青贮中松针水平的增加，呈现下降趋势。饲喂30%松针与苜蓿混合青贮，日粮干物质、粗蛋白质、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维消化率最低，且显著低于对照组。其主要原因是松针中所含酚类物质、萜烯和单宁等次级代谢产物，随日粮中松针水平的提高其含量增加，对饲料养分的消化产生负面影响[16]。Wiedmeier 等[17]（1992）通过动物体内试验表明，松针对体内瘤胃微生物种群具有毒性作用，特别是对纤维分解菌影响较大。单宁对饲料消化率有负面影响，已发现日粮中高水平单宁可抑制微生物对植物细胞壁的分解作用[18]。另外，低分子量的酚类物质也可限制微生物对结构性碳水化合物的降解[19]。Hawke[20]（1985）报道，枯松针和鲜松针在绵羊体内的干物质消化率分别为23.4%和35.0%，而干草和鲜牧草分别为60.0%和74.1%。本试验中随着混合青贮中松针水平的增加，羔羊日粮干物质、粗蛋白质、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的消化率显著降低，这与Adams 等[21]（1992）用12.5%、25%、50%的松针粉替代冰草饲喂羔羊，随松针添加水平的提高，日粮干物质、粗蛋白质、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维消化率显著降低，且均低于对照组的试验结果相似；Pfister 等[22]（1992）以15%、30%的松针粉替代干草对日粮干物质、粗蛋白质和酸性洗涤纤维的消化率无显著影响，以40%的松针粉替代干草则显著降低阉牛日粮干物质、粗蛋白质和酸性洗涤纤维的消化率，也证明过量饲喂松针可降低动物日粮养分消化率。

研究表明，钙离子可与植物中单宁络合，形成不溶性钙，进而阻碍机体对钙离子的吸收[23]。在绵羊体内试验中，随饲粮中单宁水平（0、1.70、3.40g/kg DM）的增加，钙消化率有降低趋势，对磷的消化率无影响[24]。本试验也显示出相似的结果，随日粮中松针比例的增加，育肥羔羊日粮钙、磷的消化率无显著变化，证明各试验组日粮单宁水平对钙、磷消化率无影响。

4 结论

综合分析本次试验结果，育肥羔羊采食不同比例松针与苜蓿混合青贮饲料，对育肥羔羊血液生化指标无显著影响，且均在正常值范围内，证明松针与苜蓿混合青贮饲料对羔羊无毒副作用；松针与苜蓿混合青贮中松针比例为30%时，显著降低育肥羔羊日粮干物质、粗蛋白质、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的消化率。提示在青贮饲料干物质占粗饲料70%的饲喂条件下，苜蓿混合青贮中松针比例以低于30%为宜。今后有待研究的问题：（1）松针与苜蓿混合青贮前后酚类物质、萜烯和单宁等主要次级代谢产物含量的变化。（2）饲喂松针与苜蓿混合青贮饲料对绵羊瘤胃微生物的影响。