李曼 董诚明 王鑫源 杨朝帆 许贞

摘要：为探索不同植物生长调节剂及喷施次数对怀牛膝生产的影响效果，研究氯化胆碱+萘乙酸、芸苔素內酯、氯化胆碱及18%氯胆.萘乙酸对怀牛膝产量及品质的影响。结果表明，植物生长调节剂可使牛膝增产，不同植物生长调节剂及喷施次数的浸出物、B-蜕皮甾酮、多糖含量均有不同的表现，变异系数权重法综合分析得出氯化胆碱+萘乙酸喷施3次效果较佳。

关键词：牛膝;植物生长调节剂;种类;次数;品质

牛膝为苋科植物牛膝（Achyramhes bidentata Bj）的干燥根。性味苦、甘、酸、平。功能有活血通经，补肝肾，强筋骨，利尿通淋，引血下行。始载于《神农本草经》，列为上品。牛膝在我国大部分地区均有分布，但以河南武陟、温县、博爱、泌阳等地为主要产区，是我国著名的“四大怀药”之一。牛膝最主要的活性成分为蜕皮甾酮、齐墩果酸型三萜皂苷以及多糖类。近年来的药理研究表明，牛膝具有调节免疫系统、抗衰老、抗肿瘤、抗骨质疏松等多种药理作用，且对2型糖尿病及心血管系统均有一定的治疗作用。

植物生长调节剂可增加叶片的光合效率，制造更多的营养物质向块根、块茎输送，从而提高产量。且植物生长调节剂的作用面广、应用领域多，故而其使用越来越普遍。植物生长调节剂的不合理使用会造成中药材活性成分含量降低，影响药材疗效。为探索植物生长调节剂对怀牛膝生产的影响，研究氯化胆碱+萘乙酸、芸苔素内酯、氯化胆碱及18%氯胆.萘乙酸喷洒不同次数对怀牛膝产量及品质的影响，为植物生长调节剂的使用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1试验材料

供试植物生长调节剂为：①大块头（氯化胆碱70%+萘乙酸2%）：水剂，山东菏泽永杰农化有限公司生产;登记证号：农肥（2005）准字0365号。②天丰素（芸苔素内酯0.01%）：水剂，江门市大光明农化新会有限公司生产;生产批号：HNP44024-E0684。③氯化胆碱（氯化胆碱60%）：水剂，重庆双丰化工有限公司生产;生产批号：HNP55008-E0577。④地胖哥（氯化胆碱17%、萘乙酸1%）：粉剂，重庆双丰化工有限公司生产;生产批号：HNP55008-E0095。

1.2样品采集与试验设计

牛膝种子由河南中医药大学董诚明教授鉴定为苋科植物牛膝（Achyranthes bidentata BL）的種子，于2016年7月20日播种于河南省武陟县大封镇驾部村。试验共设17个处理（见表1），每个处理重复3次，牛膝株行距6cm x 13cm，每小区20m²。当年使用植物生长调节剂，喷施浓度按照使用说明，现配现用。

1.3测定项目与方法

1.3.1产量。2016年2月5～7日采收各小区牛膝，记录数据，进行产量分析。

1.3.2浸出物及B-蜕皮甾酮含量测定。参照《中国药典》2015版中醇溶性浸出物测定法（通则2201）项下的热浸法测定，用水饱和正丁醇作溶剂;参照《中国药典》2015版中采用高效液相色谱法测定牛膝药材中B-蜕皮甾酮含量。

1.3.3多糖含量测定。采用UV法进行多糖含量测定，最大吸收波长为625nm，以吸光度为纵坐标，100u g/mL葡萄糖标准品溶液的浓度为横坐标，进行回归处理，绘制标准曲线，回归方程为y=0.0644x-0.0406.r²=0.9923。

精密称取牛膝粉末0.5g，置锥形瓶内，加入25mL95%乙醇回流脱脂1h，药材挥醇后加入50mL蒸馏水回流1h，过滤，用热水分数次洗涤药渣，合并滤液及洗液于100mL容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，精密量取lmL转移至50mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线，摇匀，即得供试品溶液;用0.2%蒽酮硫酸溶液显色，测定供试品溶液的吸光度，计算多糖含量。

1.4数据统计分析

运用Excel和DPS对数据进行整理分析，运用变异系数权重法对牛膝各个指标综合分析。

2 结果与分析

2.1 产量比较

由表2可知，P₃处理产量最高，为793.74kg/667m²;T1产量较低，为627.53kg/667m²。在喷施同种植物生长调节剂时，不同喷施次数的处理下各个小区产量：D₂>D₃>D₄>D₁、T₄>T₃>T₂>T₁、L₄>L₃>L₂>L₁、P₃>P₂>P₄>P₁。在喷施相同次数时，不同植物生长调节剂的处理下个小区产量：L₁>P₁>D₁>T₁、P₂>D₂>T₂>L₂、P₃>L3>D₃>T₃、L₄>P₄>D₄>T₄。P₃与CK之间具有显著性差异，其余处理与CK之间均无显著性差异。各处理产量均高于CK，各处理小区均对牛膝有增产作用，18%氯胆.萘乙酸喷施3次处理对牛膝增产作用最明显。

2.2浸出物及B-蜕皮甾酮含量测定

2.2.1浸出物含量测定。由表3可知，不同处理浸出物含量均符合药典规定，其中D₄处理浸出物含量最高（9.63%）;T₂处理的浸出物含量较低（6.87%）。在喷施同种植物生长调节剂时，不同喷施次数的各处理浸出物含量：D₄>D₂>D₃>D₁、T₄>T₁>T₃>T₂、L₃>L₂>L₄>L₁、P₃>P₂>P₄>P₁。在喷施相同次数时，不同植物生长调节剂的各处理浸出物含量：T₁>D₁>P₁>L₁、D₂>P₂>L₂>T₂、L₃>P₃>D₃>T₃、D₄>P₄>T₄>L₄。D₂、D₄与CK之间具有显著性差异，其余处理与CK之间均无显著性差异。D₂、D₄牛膝药材浸出物含量均高于CK，说明氯化胆碱+萘乙酸喷施2次处理和氯化胆碱+萘乙酸喷施4次处理对牛膝质量产生有利影响，D₄含量最高，说明其处理可有效地提高牛膝中醇溶性浸出物的含量，进而对牛膝质量有一定的改善作用。

2.2.2β-蜕皮甾酮含量测定。由表3可知，P₄处理的β-蜕皮甾酮含量最高（0.089%），T₂处理的β-蜕皮甾酮含量最低（0.031%）。在喷施同种植物生长调节剂时，不同喷施次数的各处理β-蜕皮甾酮含量：D₄>D₂>D₁>D₃、T₃>T₄>T₁>T₂、L₄>L₁>L₃>L₂。在喷施相同次数时，不同植物生长调节剂的各处理β-蜕皮甾酮含量：P₁>L₁>D₁>T₁、P₂>D₂>L₂>T₂、T₃>P₃>L₃>D₃、P₄>T₄>D₄>L₄。D₃、T₁和T₂与CK之间具有显著性差异，其余处理与CK之间均无显著性差异。D₃、T₁、T₂，这3种处理牛膝药材中β-蜕皮甾酮含量均低于CK，说明氯化胆碱+萘乙酸喷施3次处理、芸苔素内酯喷施1次处理和芸苔素内酯喷施2次处理降低牛膝药材中β-蜕皮甾酮的含量，进而可能会对牛膝药材质量产生不利影响。

2.2.3多糖含量测定。由表3可知，T₄处理的多糖含量最高（8.08%），P₄处理的多糖含量最低（5.25%）。在喷施同种植物生长调节剂时，不同喷施次数的各处理多糖含量：D₃>D₂>D₄>D₁、T₄>T₂>T₃>T₁、L₂>L₄>L₃>L₁、P₃>P₂>P₁>P₄;在喷施相同次数时，不同植物生长调节剂的各处理多糖含量：D₁>T₁>P₁>L₁、L₂>D₂>T₂>P₂、D₃>P₃>T₃>L₃、T₄>D₄>L₄>P₄。D₃、T₄與CK之间具有显著性差异，其余处理与CK之间均无显著性差异;D₃、T₄牛膝药材多糖含量均高于CK，说明氯化胆碱+萘乙酸喷施3次处理和芸苔素内酯喷施4次处理可提高牛膝中的多糖含量。

3 结论与讨论

植物生长调节剂是一类与植物激素具有相似生理和生物学效应的人工合成物质。植物生长调节剂的应用，可调控植株的生长发育，增强植物抗逆性，增加中药材的产量，提高中药材有效成分的含量，改善药材品质。牛膝中主要以蜕皮甾酮和牛膝甾酮的形式存在，其中蜕皮甾酮是牛膝中的主要药用成分;牛膝中的多糖类成分含量较高，作用于人体内，能够起到抑制肿瘤转移、增强免疫力等作用。试验采用4种不同种类的植物生长调节剂，每种植物生长调节剂均设置了4种不同的喷施次数，选择用不同的植物生长调节剂及不同喷施次数对牛膝进行处理，以达到高产优质为目的。从各处理的综合得分均高于CK可以看出，植物生长调节剂在一定程度上能提高牛膝的产量，改善其品质。试验表明，不同喷施次数、4种类型的植物生长调节剂在牛膝上的使用产生了不同的效果，牛膝各处理的产量均高于CK，可见植物生长调节剂对牛膝有增产效果;变异系数权重法综合分析得出氯化胆碱+萘乙酸喷施3次效果较佳。

药材农药残留量测定以及土壤中植物生长调节剂残留量测定也很重要，在牛膝栽培的过程中，若过多地使用植物生长调节剂，可能对人体、土壤及环境造成危害，农药的残留量超标也会影响中药材的疗效以及用药安全，有待进一步研究。