范垭玲，田智全,2，庞代文，张志凌*

(1.武汉大学化学与分子科学学院，湖北武汉 430072；2.西藏大学理学院，西藏拉萨 850000)

1 前言

20世纪50年代，Weber首次将荧光各向异性法应用于生化分析领域，用于牛血清白蛋白和卵白蛋白的相互作用研究[1]。之后，荧光各向异性方法的研究越来越受到重视[2]。

上世纪80年代，随着荧光探针和荧光各向异性分析仪器的商业化，荧光各向异性技术在生命科学等各个领域扮演着越来越重要的角色[3-5]。归其原因主要有：(1)荧光各向异性分析属于均相分析，不需要分离、洗涤步骤，操作简便[6,7]；(2)可直接、实时测定荧光探针的结合/解离速率[8]；(3)易于实现高通量、自动化分析[9-11]；(4)探针设计简单，只需要一个荧光分子标记[12]。然而，由于检测目标分子的体积或质量很小，与探针结合不能引起明显的荧光各向异性值的改变，因此研究者们采用一些荧光各向异性信号放大策略来解决这一问题，从而大大提高了该方法的灵敏度。本文对荧光各向异性法的检测原理和信号放大策略展开综述。

2 荧光各向异性法的检测原理

2.1 基本原理

荧光各向异性是荧光分子的固有属性。当荧光分子定向排列后，荧光分子发出的荧光具有各向异性。此时，用取向垂直和水平的检偏器就会检测到不同的荧光强度。

1920年，Perrin等对这一现象进行理论研究，并提出了关于荧光各向异性值(r)的Perrin方程。对于荧光寿命值固定的荧光分子，若它在介质中保持静止不旋转状态，r非常大，趋近于1；若它在介质中自由旋转，r趋近于0。……