王利玲

（河南建筑职业技术学院，河南 郑州 450064）

黄柳菇（Pholiota adiposa）学名为黄伞，又称黄蘑、柳蘑、多脂鳞伞等[1]。因其子实体呈金黄色，而且菌盖菌柄上布满黄褐色鳞片而得名。黄柳菇是一种中低温型食用菌，其味道鲜、肉质滑嫩、风味独特，而且含有大量的蛋白质、碳水化合物、维生素和矿物质，营养成份丰富，是一种市场前景良好的食用菌新品种[2]。中医认为，黄柳菇味甘，性平，具有渗湿利水，缓中止痛的功效[3]。可以有效的促进体内新陈代谢，加速身体废弃物和有毒物的排出。改善腹胀、腹泻、周身水肿等现象，常被用于治疗水肿、腹泻、腹胀等[4]。现代医学研究发现黄柳菇中含有一些核酸、黄酮类物质。对精力不足、过度疲劳等有很好的辅助治疗效果，可以快速恢复体力[5]。特别是对于过度运动训练的运动员来说，能够有效抵抗运动性疲劳，提高免疫力，促进身体运动功能的恢复。

黄柳菇的总黄酮是其含有的黄酮类化合物的总称，具有很强的抗氧化和消除自由基作用，而且还有止咳、平喘、祛痰、抗菌、抗病毒及消炎作用；对心血管疾病也有很好的疗效，是许多中草药的有效成分[6]。通过就黄柳菇中总黄酮类物质对过度运动训练的影响开展研究，探讨黄柳菇总黄酮等有效成份对免疫系统的影响。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

黄柳菇干品由长治市金善生物科技有限公司提供，一级品，杂质含量≤0.1%。

蒸馏水、无水乙醇（分析纯），上海凯茵化工有限公司；磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液（pH 2.2～8.0），上海古朵生物科技有限公司；丙二醛（MDA）、超氧化物岐化酶（SOD）试剂盒，上海双赢生物科技有限公司；小鼠肝糖原、肌糖原试剂盒，上海沪峥生物科技有限公司

1.2 仪器设备

TM-EXA1003H-G型精密电子天平，南京汤姆斯衡器有限公司；WND-200型高速中药粉碎机，北京普析通用仪器有限公司；RE-5299旋转蒸发仪，上海越众仪器设备有限公司；THZ-82A回旋式水浴恒温振荡器，常州金坛良友仪器有限公司；PHS-828实验室PH计，北京天地首和科技发展有限公司；TU-1800紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限公司；KA-1000型台式离心机，上海市安亭电子仪器厂；DB030型运动试验跑台，北京智鼠多宝生物科技有限责任公司；SMT-120全自动生化分析仪，成都斯马特科技有限公司。

1.3 黄柳菇总黄酮的提取

总黄酮提取方法很多，有采用不同溶剂浸泡的方法、加热提取法、水浴回流乙醇提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法、半仿生提取法等[7]。其中半仿生提取法因符合口服给药经胃肠道转运吸收的原理，更易于人体吸收而受到广泛关注，已成功地应用在了杜仲叶、葛根、苦参、石榴果皮等植物总黄酮的提取上[8]，因此采用半仿生提取法进行黄柳菇总黄酮的提取。

将黄柳菇干品清洗干净后切段、烘干、粉碎研磨制成粉末，过80目筛后用乙醇作为浸提剂，按料液比为1∶20混合均匀。根据仿生学原理，人体的胃、小肠、大肠的体液环境pH是由酸性向碱性转变的。用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液模拟胃肠道pH，分别调pH为2.2、6.8、7.0（取胃、小肠、大肠体液pH中值），在恒温水浴70℃下提取60 min，合并3次提取液，蒸发浓缩至50%体积得黄柳菇总黄酮提取液。

1.4 总黄酮含量的测定

精确称取黄柳菇总黄酮提取液，4 500 r·min-1离心10 min，取上清液转移至100 mL容量瓶，再用提取时对应的乙醇浓度定容，取1 mL溶液稀释50倍作为待测液。取2.5 mL待测液于25 mL比色管中，按照标准曲线方法用分光度计测定吸光度。黄柳菇总黄酮含量M（%）的计算公式为：

M ＝[（A ×25.0 ×5 000）/（B ×2.5 ×100）]×100%式中：A为通过标准曲线查到的总黄酮质量浓度（mg·mL-1）；B为黄柳菇提取液用质量（g）。

根据上述方法测得黄柳菇总黄酮含量为6.55%.

1.5 试验分组

取雌雄各半的SPF级小鼠，体重（20±3） g。适应性喂养3 d后进行跑台适应性训练。选择能够连续正常跑步的小鼠进行下一步过度运动训练，设置跑台速度为12 m·min-1，倾角15°。每天下午各进行2组过度运动训练，每组训练之间休息10 min。过度训练的判断标准是小鼠力竭匍匐在跑台不动时，连续2次给予2 mA电压的电刺激，小鼠仍然腹部着地不动。连续1周后建立小鼠过度训练模型。

末次过度运动训练结束后，按体重将小鼠随机分成3组开始灌胃试验，每组10只。高剂量组、中剂量组、低剂量组每日上午分别经口灌胃1次剂量为 400 mg·kg-1、200 mg·kg-1和 100 mg·kg-1的黄柳菇总黄酮提取液；对照组灌胃同样体积蒸馏水；下午继续进行跑台过度运动训练，跑台速度提升到为15 m·min-1，其它参数不变，连续3周。

1.6 小鼠体内抗氧化试验

末次跑台过度运动训练结束后，将小鼠麻醉，摘取小鼠的心脏和肝脏。按照试剂盒要求测定MDA、SOD、肝糖原和肌糖原含量。摘取小鼠眼球后在眼眶处采血，按操作手册进行乳酸（LD）、肌酸激酶（CK）、血尿素氮（BUN） 含量测定。

2 试验结果与分析

2.1 黄柳菇总黄酮对过度训练小鼠心肌组织抗氧化酶的影响

小鼠心肌组织中的抗氧化酶测量结果如表1所示。

表1 黄柳菇总黄酮对小鼠心肌组织抗氧化酶的影响Tab.1 Effect of total flavonoids of Pholiota adiposa on the antioxidant enzymes in the myocardium of mice

由表1可知，与对照组相比，低剂量组MDA含量上升而中、高剂量组下降；与对照组相比下，高剂量组、中剂量组、低剂量组的SOD含量均有所上升。

2.2 黄柳菇总黄酮对过度训练小鼠肝糖原和肌糖原的影响

小鼠肝脏组织中的肝糖原和肌糖原含量测量结果如表2所示。

由表2可知，与对照组相比，高剂量、中剂量、低剂量组的肝糖原和肌糖原含量均有所上升。

2.3 黄柳菇总黄酮对过度训练小鼠血液生化指标的影响

灌胃黄柳菇总黄酮后对小鼠血液中LD、CK、BUN含量的影响如表3所示。

表3 黄柳菇总黄酮对小鼠血液LD、CK、BUN的影响Tab.3 Effect of total flavonoids of Pholiota adiposa on the content of LD,CK and BUN in blood of mice

由表3可知，与对照组相比，低剂量组小鼠血乳酸含量略微上升了0.17%，而高剂量组、中剂量组则分别下降了31.64%和11.46%，灌胃高剂量的黄柳菇总黄酮对血乳酸含量的下降影响最大；与对照组相比，高剂量组、中剂量组、低剂量组小鼠血液中肌酸激酶含量分别下降了30.55%、13.31%和13.84%，其中高剂量组对肌酸激酶含量下降的影响最大，黄柳菇总黄酮灌胃剂量与肌酸激酶含量呈一定的反比关系；与对照组相比，高剂量组、中剂量组、低剂量组小鼠血液中血尿素氮含量分别下降了25.73%、13.50%和5.09%，其中高剂量组对血尿素氮含量下降的影响最大，黄柳菇总黄酮灌胃剂量与血尿素氮含量呈一定的反比关系。

3 讨论

运动员在高强度过度运动训练时，身体需要大量的氧气来产生能量，导致氧化产物“自由基”的生成增多。自由基是一种有害的氧化产物，过多的自由基使身体不能被有效清除。身体正常的细胞也不能被有效修复还原，造成组织细胞受损或变性坏死、DNA裂解老化等现象。很容易产生细胞病变和衰老，引起免疫力下降、运动功能受损、甚至诱发癌症、肿瘤等疾病。

而总黄酮的主要功效就是其抗氧化性，通过清除多余的自由基，有效对过度运动产生的机体细胞受损进行修复。减少过氧化现象，从而预防运动功能下降、提升机体免疫力。

试验结果表明，对过度训练的小鼠灌胃黄柳菇总黄酮后，小鼠体内具有细胞毒性的MDA含量明显降低，而具有清除自由基能力的SOD含量有所上升。由于过度运动训练时，体内自由基产生大幅激增，体内的SOD含量会出现应激性增高。但随着高浓度自由基对SOD的大量消耗，以及机体的失代偿，SOD含量会很快回落到低水平。

小鼠体内肌糖原和肝糖原的增加是为了给过度运动提供充足的无氧代谢能量，以维持血糖水平相对稳定。灌胃黄柳菇总黄酮后2个指标的提升表明，黄酮也能够刺激小鼠体内运动能量的储备。

综上所述，黄柳菇总黄酮能够有效抑制过度运动训练时的心肌、骨骼肌等组织的过氧化现象，维持机体酸碱平衡、修复受损细胞，改善血液循环，促进新陈代谢等作用，对恢复机体的运动功能有一定的功效，后期还需深入研究其作用机理，为黄酮医药、保健品领域的进一步应用提供理论依据。