陈艳蕾，兰天飞，石海云，王学艳

(首都医科大学附属北京世纪坛医院变态反应科，北京 100038)

过敏性疾病患病率约占世界总人口的22%，已成为全球重要的公共卫生问题之一[1]。变应原检查至关重要，是过敏性疾病诊断和特异性免疫治疗的重要依据之一[2]。变应原的检测方法主要有体内检测和体外检测[3]。其中体外检测指血清学检验，常用于检测血清特异性免疫球蛋白E(specific immunoglobulin E，sIgE)抗体，其特点为特异性高、安全、可靠、基本不会给患者带来痛苦，不受用药影响、仪器自动判读结果，可重复性好[4]。目前普遍认为体外检测无需空腹。但有研究发现，血脂和过敏之间存在一定的关联，且血脂异常和特应性倾向具有相同的免疫通路[5-6]；同时IgE是糖尿病前期的个体危险因素[7]。进餐后人体血糖和血脂是变化的，血脂、血糖和过敏之间存在着一定的关联，因此进餐前后血糖血脂的变化可能影响血中变应原sIgE的检测水平，成为变应原检测的干扰因素。此外，血样在采集、转运、保存以及检测过程中，操作不规范、患者自身或外界因素等影响，也可能会干扰变应原检测结果。本研究旨在分析空腹血糖血脂正常者和升高者进餐、血样溶血及采血后血样静置时间对血清变应原sIgE检测水平的影响，从而指导临床实验室变应原检测并为变应原检测操作规范的制订提供支持。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年3月在首都医科大学附属北京世纪坛医院变态反应科门诊就诊的患者(年龄20～65岁)作为研究对象，分别筛选出空腹血糖血脂正常者26例和空腹血糖血脂(两者任一)升高者12例。其中，空腹血糖血脂正常者男12例、女14例，年龄20～64岁，平均(42±13)岁；空腹血糖血脂升高者男5例、女7例，年龄35～65岁，平均(53±8)岁。所有入组人员均在进餐前后分别采静脉血，分别将空腹血糖血脂正常者和升高者血样分为空腹及餐后2组，其中空腹血糖血脂正常者：空腹血样为A组，餐后血样为B组，各26例；空腹血糖血脂升高者：空腹血样为C组，餐后血样为D组，各12例。所有入组人员(38例)中，随机抽取26例血样进行人工溶血(溶血组)，将与之对应的26例未溶血血样予以常规处理(常规处理血清组)；随机抽取12例血样静置5 min即离心备检。

1.2研究方法 分别采集所有入组人员空腹及餐后2 h静脉血各8 mL置于2个采血管。其中，常规处理血清组予以常规处理，利用负压缓慢在试管内注入血液标本，溶血组则将试管帽去除后，将血液标本迅速转移至试管内，同时来回快速抽吸10次导致标本溶血。随后在室温下静置30 min，所有血液标本采用SiGMA 3-18K型离心机(北京博劢行仪器有限公司生产)，离心半径为15.5 cm，3 000 r/min离心3.5 min备检。

所有血样均采用全自动酶免分析仪(深圳市爱康生物科技有限公司生产，型号：URANUS AE85型)检测血清sIgE抗体，包括屋尘螨、粉尘螨、艾蒿、普通豚草、蟑螂、猫上皮、犬上皮、屋尘、交链孢霉、柳树，试剂盒购自江苏浩欧博生物医药股份有限公司(批号：20190101)。采用全自动生化分析仪(美国贝克曼库尔特有限公司生产，型号：AU5832型)分别检测空腹血样血糖、三酰甘油和总胆固醇(均在首都医科大学附属北京世纪坛医院检验科进行检测)，其中葡萄糖和总胆固醇测定试剂盒购自美国贝克曼库尔特有限公司(批号：5504和5336)，三酰甘油测定试剂盒购自柏定生物工程(北京)有限公司(批号：0822)。

1.3统计学方法 采用SPSS 22.0(SPSS Inc.,Chicago,IL,USA)统计软件进行数据处理，不服从正态分布的计量资料数用中位数(四分位间距)[M(P25，P75)]表示，采用配对样本的Wilcoxon秩和检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1空腹与餐后血糖血脂对变应原检测结果的影响

2.1.1空腹血糖血脂正常者空腹及餐后的变应原血清sIgE水平比较 A组和B组的各变应原血清sIgE水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 空腹血糖血脂正常者空腹及餐后的变应原血清sIgE水平比较 [kUA/L，M(P25，P75)]

2.1.2空腹血糖血脂升高者空腹及餐后的变应原血清sIgE水平比较 C组和D组的各变应原血清sIgE水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 空腹血糖血脂升高者空腹及餐后的变应原血清sIgE水平比较 [kUA/L，M(P25，P75)]

2.2溶血对变应原检测结果的影响 常规处理血清组和溶血组的屋尘螨、粉尘螨、艾蒿、普通豚草、蟑螂、犬上皮、屋尘的血清sIgE水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；溶血组猫上皮血清sIgE水平高于常规处理血清组，交链孢霉和柳树血清sIgE水平低于常规处理血清组(P<0.05)。见表3。

表3 溶血前后变应原血清sIgE水平的比较 [kUA/L，M(P25，P75)]

2.3血样静置时间对变应原检测的影响 12例血样静置5 min即离心，其中1例血样出现溶血，9例血样血清中不同程度出现凝胶块或凝胶丝，仅2例分离出正常血清。本研究所有静置30 min后离心的血样(人工溶血除外)均未出现溶血或凝胶块(丝)。

3 讨 论

过敏性疾病患者的血清总IgE水平往往升高，但不能明确其过敏反应的诱发因素[8]。而对变应原sIgE进行检测，可以初步判断患者在接触某变应原时可能会出现过敏现象[9]。变应原sIgE抗体的检测对于过敏性疾病的临床治疗及预防均有积极意义，已被纳入多项临床疾病的诊疗指南[4]。sIgE水平与部分过敏性疾病的严重程度具有相关性，可协助疾病分型及精准治疗[4]。研究证实，血清sIgE/总IgE比值>16.2%可以很好地预测变应原特异性免疫治疗的临床疗效[10-11]。这些均对变应原sIgE和总IgE定量检测的精准性提出了更高的要求。

目前一系列研究发现，血糖、血脂和过敏之间可能存在一定的关联。如7岁儿童的血脂水平与哮喘、气道阻塞、支气管反应性和空气变应原致敏有关[6]。总胆固醇可能增加变应原sIgE的产生，进而加重过敏症状[12]。母亲孕期糖尿病增加了婴儿过敏性疾病的患病风险；与正常孕妇相比，孕期糖尿病患者存在更为明显的辅助性T细胞(helper T cell，Th)1下调和Th2上调，即Th1/Th2比值下降[13]。进餐会影响机体血糖、血脂水平的变化，因此其有可能影响血液中sIgE的定量检测结果。本研究中，无论是空腹血糖血脂正常者还是空腹血糖血脂升高者，其空腹和餐后各变应原血清sIgE水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)，提示虽然血脂异常和特应性倾向具有相同的免疫通路，但血糖血脂的变化在短时间内不易引起体内免疫系统发生变化，Th1和Th2细胞的失衡在血糖血脂的长期异常后出现，继而使血液sIgE水平发生改变。另有研究发现，美国人群血清总胆固醇与特应性之间存在明显的种族差异[14]。而本研究所采血样sIgE空腹和餐后检测值比较差异无统计学意义可能与研究人群有关。

标本溶血是指标本因各方面因素的影响而导致红细胞发生破裂[15]，主要分为体外溶血及体内溶血[16]。检测对象长期服用易导致溶血的药物，或患有恶性疾病，则易引发体内溶血；血液标本在采集、分离、运送以及保存过程中，若操作不当，易导致体外溶血[15]。体外溶血是血液检验中血样最常出现的一种不良现象。诸多研究认为发生溶血后，血样中的血小板、红细胞以及白细胞会释放诸多对结果造成影响的物质，进而影响血常规和血生化检测结果，如K+、乳酸脱氢酶等显著升高[17-19]。研究发现，血清内乳酸脱氢酶、天冬氨酸转氨酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、CD4+等水平均与支气管哮喘患儿的病情严重程度呈正相关[20]；血清总IgE、变应原sIgE、乳酸脱氢酶等血清生物标志物与特应性皮炎病情严重程度、病情活动度相关[21]，提示乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶等可能与机体免疫系统存在交互作用，从而影响sIgE水平。本研究结果显示，正常处理血清组和溶血组部分变应原血清sIgE水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，但猫上皮、交链孢霉及柳树变应原血清sIgE水平比较差异有统计学意义(P<0.05)，考虑可能为溶血后细胞内成分释放入血或使血清严重稀释，引发变应原检测结果的异常，具体机制尚需进一步探讨。因此，建议血液标本在采集、分离、运送以及保存过程中一定严格按照操作规程操作，防止溶血现象的发生，以保证变应原检测结果的准确性。

本研究中，随机抽取12例血样静置5 min即离心，其中1例血样出现溶血，9例血样血清中不同程度出现凝胶块或凝胶丝，仅2例分离出正常血清。考虑是由于静置时间过短，不能保证血样彻底凝固，对凝固不全的血样进行离心时，极易出现纤维蛋白形成，一方面增加了血清和红细胞的粘连，使血清不易和红细胞分离从而导致溶血；另一方面则易在血清中形成凝胶块或凝胶丝，这种血样在检测过程中由于血清量较少，不能满足变应原检测所需血清量，无法完成变应原检测，同时其凝胶块或凝胶丝会造成仪器检测取样时堵塞探针，影响检测进程及结果。而静置30 min后离心的血样均未出现溶血或凝胶块(丝)，故建议采集血样静置30 min后再行离心检测，以保证变应原检测的顺利进行和检测结果的准确性。

综上可知，变应原检测无论空腹血糖血脂正常与否均不受空腹和进餐的影响，但血样溶血及静置时间过短则是变应原检测的常见干扰因素，这就要求医护及检验人员在血液标本采集、分离、运送、保存以及检测过程中一定要严格按照操作规程操作，从而使检验结果更准确可靠。但本研究样本量有限，需加大样本量进一步研究证实。