张继伟，王鹏思，朱春雨，张 博，牛洺鑫，张宗俭*

(1.中化化工科学技术研究总院有限公司，北京 100083；2.巴斯夫(中国)有限公司，北京100027)

双丙环虫酯(afidopyropen)发现于生物发酵产品，为丙烯类(pyropenes)化合物，是日本明治制果药业株式会社与北里研究所共同研发的生物源杀虫剂。其作用机制不同于常规杀虫剂，它通过干扰昆虫香草酸瞬时受体通道复合物的调控而发挥作用，从而干扰昆虫的取食和其他行为，最终导致昆虫饥饿而亡。该物质被国际杀虫剂抗性行动委员会(简称：IRAC)归入9D组的首个、同时也是唯一一个杀虫剂成分，与市面上现有虫害管理系统无交互抗性[1]。

巴斯夫欧洲公司于2019年1月30日在我国取得了92.5%双丙环虫酯原药、50 g/L双丙环虫酯可分散液剂(商品名称英威)和75 g/L阿维菌素·双丙环虫酯可分散液剂(商品名称英雷)的登记[2]。姜宜飞、吴进龙等分别报道了双丙环虫酯原药和75 g/L阿维菌素·双丙环虫酯可分散液剂的分析方法[3-4]，但对于50 g/L双丙环虫酯可分散液剂的分析方法目前国内尚未见公开报道。本文采用高效液相色谱法，对巴斯夫的“英威”进行分析，该方法操作简便、快速、准确，可以作为企业生产过程质量控制和产品质量监管机构分析检测的参考方法。

1 试验部分

1.1 材料与试剂

94.4%双丙环虫酯标样(德国Dr. Ehrenstorfer公司)；水：纯净水(屈臣氏)；乙腈：色谱纯(Thermo Fisher)；磷酸：分析纯(阿拉丁试剂)；商品名为英威的50 g/L双丙环虫酯可分散液剂(从市场购买)。

1.2 仪器与设备

岛津LC-20高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器和自动进样器；安捷伦Zorbax SB-C18色谱柱(150 ×4.6 mm, 5 µm)；超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；0.45 μm 有机相针式过滤器(津腾)；50 mL容量瓶(北京化玻站有限公司)。

1.3 液相色谱操作条件

流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(体积比40∶60)；流速：1.0 mL/min；检测波长：230 nm；柱温：30 ℃，进样体积：5.0 µL；保留时间：4.745 min。双丙环虫酯标样的高效液相色谱图见图1，50 g/L双丙环虫酯可分散液剂(英威)的高效液相色谱图见图2。

图1 双丙环虫酯标样的高效液相色谱图

图2 50 g/L双丙环虫酯可分散液剂(英威)的高效液相色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 标样溶液的配制

称取0.05 g(精确至0.000 2 g)双丙环虫酯标样于50 mL容量瓶中，加入20 mL乙腈，超声振荡5 min，使标样全部溶解，冷却至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀。用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL 容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀。用0.45 μm滤膜过滤，备用。

1.4.2 试样溶液的配制

称取0.05 g(精确至0.000 2g)双丙环虫酯的试样于50 mL容量瓶中，加入20 mL乙腈，超声振荡5 min，冷却至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀。用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀。用0.45 μm滤膜过滤，备用。按照上述方法分别配置试样溶液1和试样溶液2。

1.4.3 测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续进数针标样溶液，直至相邻2针双丙环虫酯标样的响应值相对变化小于1.5%后，按照标样溶液1、试样溶液1、试样溶液1、标样溶液1、标样溶液1、试样溶液2、试样溶液2、标样溶液1的顺序进行测定。

1.4.4 计算

将测得的2针试样溶液中双丙环虫酯峰面积以及试样前后2针标样溶液中双丙环虫酯响应因子分别进行平均。试样中双丙环虫酯的质量分数ω1(%)按式⑴和⑵计算：

式中：f为标样溶液中双丙环虫酯的响应因子；m1为双丙环虫酯标样的质量，g；A1为标样溶液中双丙环虫酯峰面积的平均值；ω1为试样中双丙环虫酯的质量分数，%；A2为试样溶液中双丙环虫酯峰面积的平均值；ω为双丙环虫酯标样的纯度，%；m2为试样的质量，g。

将试样溶液1和试样溶液2中测得的双丙环虫酯质量分数的平均值作为测定结果。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

采用自带DAD检测器光谱数据采集功能的岛津LC-20，在200～400 nm，对试样溶液进行紫外扫描，得到双丙环虫酯的吸收波长与响应值的紫外吸收光谱图(图3)。发现双丙环虫酯在230 nm附近有最大紫外吸收，杂质干扰小，且流动相无吸收，故将检测波长选定为230 nm。

图3 双丙环虫酯的紫外吸收光谱图

2.2 流动相的选择

采用安捷伦 SB-C18(150 ×4.6 mm，5 µm)色谱柱进行反相液相色谱分析。结合双丙环虫酯自身的理化性质特点，采用常用的乙腈-水体系作为流动相。为了得到更好的峰形，在水相体系里加入0.1%的磷酸。通过对不同配比的乙腈-0.1%的磷酸水体系的分离效果对比，确定最佳的流动相配比为乙腈-0.1%磷酸水(体积比40∶60)，流速为1.0 mL/min。此时，有效成分的保留时间为4.7 min左右，且有效成分能与杂质很好地分离。谱图基线平稳，峰形尖锐且对称，分析时间较短。

2.3 方法的特异性

采用二极管阵列检测器，在200～400 nm，对50 g/L双丙环虫酯可分散液剂样品溶液进行光谱纯度检查，4.746 min色谱峰的光谱纯度为1.000 000(图4)，表明此波长处杂质对有效成分没有干扰，符合定量分析要求。

图4 50 g/L双丙环虫酯可分散液剂HPLC-PDA峰纯度色谱图

2.4 方法线性相关性的测定

以乙腈为溶剂，分别配制质量浓度约为 0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 g/L的双丙环虫酯标样溶液，按照上述色谱条件，依次进行测定。将测得的结果，以双丙环虫酯质量浓度为横坐标，不同质量浓度溶液的峰面积为纵坐标，绘制双丙环虫酯的线性相关曲线。结果表明：双丙环虫酯在质量浓度为0.02～0.50 g/L时呈线性关系，其线性方程为y=1×107x+10 400，线性相关系数R2为1.000 0，双丙环虫酯在测定的质量浓度范围内线性关系良好(图5)。

图5 双丙环虫酯峰面积与质量浓度关系图

2.5 方法精密度的测定

在上述色谱分析条件下，从同一个50 g/L双丙环虫酯可分散液剂样品中准确称取6个试样，进行平行测定，考察方法的精密度(表1)。从表1可知，双丙环虫酯的标准偏差为0.01%，变异系数为0.21%。这表明该方法的重现性良好，精密度高，能够满足定量分析的要求。

2.6 方法准确度的测定

从已知质量分数(4.71%)的50 g/L双丙环虫酯可分散液剂中准确称取6个试样，分别加入一定量的双丙环虫酯标准品，按照 1.3节的液相色谱条件测定待测样品中双丙环虫酯的质量，计算得双丙环虫酯的平均回收率为 100.06%。这表明该方法回收率较好，准确度高。

表1 精密度试验

表2 准确度试验

3 结 论

研究和建立了反相高效液相色谱法分析巴斯夫的市售产品50 g/L双丙环虫酯可分散液剂的方法。试验结果表明，该方法具有较高的精密度和准确度，线性关系良好，简单快速，适用于50 g/L双丙环虫酯可分散液剂的定性定量分析，为相关产品监管部门提供了检测依据。