（长江大学动物科学学院，湖北荆州 434025）

猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）属于圆环病毒科，是迄今为止脊椎动物中最小的DNA 病毒之一[1]。PCV 有多个血清型，如PCV-1、PCV-2及PCV-3 等[2-4]。PCV-1 是猪肾细胞系的污染物，对猪无致病性，但能产生血清抗体。相比之下，PCV-2 具有致病性，以侵害动物体内的免疫系统为主，是公认的世界上危害最严重的猪病病原之一[4-6]，是断奶仔猪多系统衰竭综合征（postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）和皮炎与肾病综合征（PNDS）的主要病因。PCV-2 可感染各阶段猪群：5～16 周龄阶段，易导致PMWS；育肥后期（16～22 周龄），则更多表现呼吸疾病综合征[7-9]。最近发现的PCV 3 与猪皮炎与肾病综合征以及生殖衰竭、心脏和多系统炎症有关，但其致病机制尚不清楚[10-11]。

为了解华中地区临床发病猪群PCV-2 感染状况及特点，2018—2019 年，从湖南省、湖北省部分地区规模化猪场，采集1 550 份临床发病猪样本，利用本实验室建立的巢式PCR 方法进行PCV2 病原学检测，并分析不同地区、不同养殖阶段、不同季节及与其他疾病混合感染情况，以期为今后PCV-2 净化提供依据和数据支撑。

1 材料与方法

1.1 样品来源

2018 年3 月—2019 年2 月，从湖北省的武汉、随州、咸宁、荆州，湖南省的常德、衡阳、汨罗、株洲等8 个地市的40 个规模化猪场（存栏量＞500头），采集出现PMWS、PDNS、繁殖障碍、传染性先天性震颤（CT）、腹泻等临床症状的发病猪群，每月1 次采样（前腔静脉采血），共计采集1 550份血清样品，-20 ℃保存待检（表1）。被检猪场均按各自制定的PCV-2 免疫程序进行免疫。

表1 样品采集信息统计 单位：份

1.2 主要试剂

Taq-DNA 聚合酶、反转录试剂盒，购自宝生物工程（大连）有限公司；琼脂糖，为Spanish 公司产品；TS-GelRed 核酸凝胶染料、DL-2000 DNA Marke、琼脂糖，购于擎科生物科技有限公司；AxyPrepTMBody Fluid Viral DNA/RNA Miniprep Kit试剂盒，购至美国AXYGEN 公司。

1.3 样品处理及病毒核酸提取

将采集的全血1 500 r/min 离心30 min，取上清；按照Axygen 体液提取试剂盒说明书，对上清进行病毒核酸提取；用Nanodrop 1 000 检测所提取DNA 的浓度和纯度，然后将DNA 于-20 ℃保存备用。

1.4 病原学检测

采用本实验室建立的巢式PCR 检测方法[12-15]，对样品进行病原学检测。引物序列如表2 所示。

表2 扩增糖蛋白基因的引物序列

1.5 数据统计与分析

对不同地区、不同养殖阶段、不同季节及混合感染的检测结果，采用SPSS 24.0 卡方检验进行差异性分析，P＞0.05 为差异不显著，P＜0.05为差异显著。

2 结果与分析

2.1 不同地区

不同地区检测结果（图1）显示：湖南、湖北两省8 个地市的PCV-2 检出率在8.79%～49.01%之间波动，平均检出率为31.68%（491/1 550），其中常德市最高（49.01%），其次是武汉、咸宁、衡阳、株洲、荆州、汨罗，随州市最低（8.79%）。该结果表明，这2 个省区的规模化猪场均存在不同程度的感染，且不同地市间PCV-2 检出率差异显著（P＜0.05）。

图1 不同地区猪群PCV-2 检出率分布

2.2 不同养殖阶段

不同养殖阶段检测结果（图2）显示：各养殖阶段猪群均有PCV-2 阳性检出，检出率在12.17%～60.84%之间，其中育肥猪（60.84%）和保育猪（58.29%）检出率较高，而哺乳仔猪（16.87%）、经产母猪（14.04%）和后备猪（12.17%）偏低。不同养殖阶段猪群的PCV2 检出率差异显著（P＜0.05）。

2.3 不同季节

不同季节检测结果（图3）显示：PCV-2 一年四季均有流行，但具有一定的季节性，其中夏季（6—8 月）检出率最高（49.81%），而春季（3—5 月）最低（5.98%）。不同季节PCV-2 检出率差异显著（P＜0.05）。

图2 不同养殖阶段猪群PCV-2 检出率分布

图3 不同季节猪群PCV-2 检出率分布

2.4 混合感染

将送检的1 550 份临床样品同时进行PCV-2、PCV-3、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）病原学检测。结果（表3）显示：除PCV-3 未检出外，其他4 种病原均存在不同程度的单一感染，其中PRRSV 单一感染率（32.39%）最高，其次是PRV（19.81%），PPV 较 低（13.55%），而PCV-2单一感染最低（2.45%）；双重感染（49.74%，771/1550）最为常见，以PCV-2+PRRSV 为主，其次是PCV-2+PRV，PCV-2+PPV 最低；三重感染率（16.58%）较低，以PCV-2+PRRSV+PRV 为主，其次是PCV-2+PRRSV+PPV，PCV-2+PRV+PPV最低。四重感染（0.06%，1/1550）极少。单一感染、双重感染、三重感染的检出率差异显著（P＜0.05）。

表3 PCV-2 混合感染情况

3 讨论

随着规模猪场数量的逐渐增多，生猪交易愈加频繁，PCV-2 感染率也逐年提高，给我国养猪业造成极大危害。本研究对2018—2019 年华中地区湖南、湖北两省8 个地市规模场送检的发病猪血清样品进行PCV-2 病原学检测，发现PCV-2 检出率在8.79%～49.01%之间，表明PCV-2 在两省规模化猪场普遍流行，平均检出率为31.68%，表明流行较为严重。韦显凯等[16]2016 年对广西部分地区猪群5 种疫病流行情况监测发现，PCV-2 检出率为39.12%；蒋新华等[17]对2013—2017 年采集自江西省10 个地区的1 082 份疑似PCV-2 感染猪病料组织进行病原学检测发现，610 份为PCV-2 阳性，总检出率为56.4%。上述结果均表明，PCV-2 在我国流行广泛且较为严重，对我国养猪业形成较大危害。不同地区间的差异，通常与猪场的饲养密度、环境控制及管理水平有关，也可能受地理环境及自然气候等因素影响。湖南省养猪业较密集，猪只调运较频繁，PCV-2 通过拉猪车、污染的工具、粪便等传播的风险较高，因此应严格执行生物安全措施，实行封闭性管理，发现可疑病猪应及时隔离，并加强外进货物、车辆、返厂人员的消毒，防止病原传入。感染率低的地区应对发病猪进行有效隔离，断绝与其他健康猪只的接触，尽可能控制PCV-2 的横向传播，同时严格把控引种猪只来源，坚持自繁自养。

不同养殖阶段猪群检测结果显示，PCV-2 可感染各养殖阶段猪群。育肥猪（60.84%）和保育猪（58.29%）感染较为严重，而哺乳仔猪（16.87%）、经产母猪（14.04%）、后备猪（12.17%）较轻，这与刘冰许等[18]对2015 年新乡市PCV-2 病原学检测的结果相近。哺乳仔猪通过摄取初乳获得母源抗体保护，从而免受PCV-2 侵害[19]。也有研究[4]表明，仔猪在母源抗体降至临界值时，如果疫苗免疫不及时，往往在仔猪断奶后转至保育时出现PMWS 症状，这也解释了保育猪群感染的主要原因。而育肥猪的饲养密度较大，猪舍环境、管理水平都有所欠缺，猪群通过口-鼻-粪或者污染工具在猪群中水平传播，因而感染概率较高。因此，仔猪应在3～6周龄接种PCV-2 疫苗；育肥、保育猪养殖密度较大，可适当增设通风口、排气扇，对转栋、转栏的猪舍（环境棉拭子）、猪只（鼻/肛拭子）的PCV-2 病原学抽样检测，做到环境、猪只双阴性方可转群；对母猪应采取PCV-2 疫苗普免（3～4 次/年）。

检测发现，该地区PCV-2感染具有一定季节性，其中夏季和冬季是感染高峰期，与段群棚等[20]调查的结果基本一致。分析原因，华中地区夏热冬寒，湿度高，冷热应激可引起猪群不适，导致机体抵抗力下降，而PCV-2 可侵害猪免疫系统，抑制体内免疫应答，影响PCV-2 疫苗的效力，从而导致感染率升高。因此，夏、冬季应严格控制猪舍温度，避免因冷热应激致使猪群的免疫力降低，且PCV-2免疫程序也需参考当地气温变化进行调整。同时，也需加强夏、冬季的综合防疫工作。

本检测结果显示，PRRSV 单一感染率较高，与PCV-2 的双重感染和三重感染较为多见，与段群鹏[21]的观点一致。这是因为PCV-2 主要侵害猪的免疫系统，导致机体免疫力下降，从而引起多种病原协同感染。因此，规模化猪场应加强猪群的PCV-2 病原学监测，完善生物安全体系，在做好PCV-2 流行控制的同时，加强对其他疾病的防控和治理。

4 结论

综上所述，湖南、湖北两省PCV-2 分布较为广泛，一年四季皆有流行，可感染所有养殖阶段猪群，与其他病原的混合感染严重，但其流行有一定的地市、猪群和季节差异，其中保育猪群感染最严重，夏、冬季节高发。建议加强高流行地区、重点猪群、高发季节的免疫、检测以及生物安全管理，逐步控制和净化PCV-2。