滕建北张 婷刘喜华刘安韬*莫展雄（.广西中医药大学 南宁53000；.广西卫生职业技术学院南宁 53003）

鼓槌石斛Dendrobiun chrysotoxum Lindl.为兰科石斛属多年生附生草本[1]，是目前市场上石斛药材的主要来源之一，具有益胃生津、滋阴清热的功效[2]。化学成分研究表明，鼓槌石斛主要含有糖类、鞣质及挥发性成分等[3-9]。石斛多糖是鼓槌石斛的主要有效成分之一，具有抗肿瘤、降血糖、保护肝脏等多种药理活性[10-16]。本研究通过正交试验，测定不同提取条件下鼓槌石斛多糖含量，确定最佳的提取工艺方法，为鼓槌石斛多糖的提取及药材质量控制提供参考。

1 材料

鼓槌石斛原药材（采自广西壮族自治区河池市宜州区），由广西中医药大学中药鉴定教研室滕建北教授鉴定，为兰科石斛属植物鼓槌石斛（Dendrobiun chrysotoxum Lindl）。除去杂质，将药材剪成小段，50℃烘干，打粉，过用三号筛，备用。

UV1780型紫外-可见分光光度计（日本，岛津公司）；SIMF140AY65-PC制冰机（日本，松下电器产业株式会社）；Merck Millipore Direct-Q，3，5，8，纯水/超纯水一体机（德国，默克集团）；HWS-28电热恒温水浴锅（上海齐欣科学仪器有限公司）；KQ-500 DA数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；D-无水葡萄糖标准品（中国食品药品检定研究院，批号：110833-201506）；浓硫酸（国药集团化学试剂有限公司，批号：20180227）；苯酚（国药集团化学试剂有限公司，批号：20151116）；其他试剂均为国产分析纯。

2 方法

2.1 多糖含量测定：以D-无水葡萄糖为对照，采用硫酸-苯酚显色法，测定多糖含量，标准曲线方程为y=7.66812x+0.00000（r=0.99926），式中x为D-无水葡萄糖质量浓度（mg/mL）、y为吸光度，测定吸光度后，根据回归方程，计算多糖含量。

2.2 提取工艺优化：取鼓槌石斛药材粉末，精密称定，在单因素提取工艺考察基础上，考察料液比（A）、提取时间（B）和提取次数（C）3个因素，每个因素设3个水平。选用L9（33）表进行正交实验，以多糖含量为评价指标，计算标准偏差，以两独立样本均数比较t检验。

3 结果

3.1 单因素实验

3.1.1 提取方法考察：分别取药材粉末0.5 g，精密称定，加蒸馏水80 mL，采用超声提取法（1 h）、回流提取法（1 h）两种方法对鼓槌石斛多糖进行提取，采用紫外分光光度计测定吸光度。结果显示采用回流提取法多糖平均含量为26.25%，而超声提取多糖平均含量为17%，前者鼓槌石斛多糖提取率最高。

3.1.2 提取次数考察：采用回流提取法，选取多糖提取时间1.5 h、料液比0.5∶40（g/mL），考察提取次数，结果显示提取3次的多糖提取率较高，但多糖提取2次和3次的含量仅相差0.25%，故提取次数为2次较为合理。见表1，见图1。

表1 提取次数考察

3.1.3 料液比考察：采用回流提取法，提取时间为1.5 h，提取2次，考察料液比对鼓槌石斛多糖得率影响，显示料液比为0.5∶50（g/mL）的提取率为最高。见表2，见图2。

表2 料液比考察

3.1.4 提取时间考察：采用回流法提取，料液比为0.5∶50（g/mL）、提取2次、考察提取时间对多糖得率影响，结果提取时间为1.5 h多糖的得率最高，见表3，图3。

3.2 正交实验：根据单因素实验，考察料液比（A）、提取时间（B）和提取次数（C）3个因素，进行L9（33）安排正交实验。结果见表4。

根据正交试验R值结果分析：料液比（A）>提取次数（C）>提取时间（B）。A因素中对指标影响K1最大，C因素中对指标影响K2最大，B因素中对指标影响K3最大，正交实验结果显示为A1B2C2测得含量最高，综合各工艺因素确定最佳提取方法为料液比 1∶100，提取时间为 1.5 h，提取 2 次。

3.3 多糖含量测定：按照正交试验设计最佳提取工艺，每份取0.5 g，共3份。置锥形瓶中，加石油醚30 mL，水浴加热30 min，取出，弃滤液，保留滤渣蒸发干溶剂，加乙醇80 mL，摇匀，水浴加热1 h，取出，弃滤液，留滤渣蒸发干溶剂，加入50 mL蒸馏水，加热回流2次，每次1.5 h，过滤，合并两次滤液，放冷置200 mL容量瓶，加纯水至刻度，摇匀，吸取1 mL置25 mL容量瓶，定容，摇匀，即得。结果鼓槌石斛提取平均多糖含量为30.65%，RSD值为4.26%。正交试验提取平均多糖含量为30.12%，RSD值为1.06%。见表5。

表3 提取时间考察

表4 正交试验结果

表5 样品含量测定结果

4 讨论

4.1 在单因素工艺考察中，回流提取法比超声提取法多糖含量明显要高，回流提取是直火加热的温度高，相比超声提取只有40℃，可能与提取温度密切相关。在提取次数中含量测定显示回流提取3次的多糖提取率较高，考虑到多糖提取2次和3次多糖含量仅相差0.25%，从减少耗能和时间方面考虑，采用提取2次。在提取时间中提取1.5 h多糖的得率较高，分析得出提取时间在2 h后含量开始降低，可能单糖被分离水解从而影响多糖的含量。

4.2 经正交试验方法得出本实验最佳多糖提取工艺条件，通过紫外-可见光分光光度法对鼓槌石斛多糖含量进行测定，试验结果表明该提取工艺方法稳定，可靠。