朱正华，王，张 馨

（云南省曲靖市食品药品检验检测中心，云南 曲靖 655000）

止咳平喘合剂是云南省曲靖市中医医院研制的院内制剂，由苦杏仁、陈皮、前胡、法半夏、化橘红、重楼、炙瓜蒌皮等组方，具有祛痰降气、止咳平喘的功效，用于治疗感冒咳嗽、咽干痰稠、喘促胸闷、久咳不止［1］。方中主药为陈皮、化橘红、当归，其中，陈皮、化橘红来源于同芸香科不同种，均含有丰富的挥发油及黄酮类化合物，陈皮主要含有橙皮苷、新橙皮苷，化橘红主要含柚皮苷、新橙皮苷及少量橙皮苷，且结构非常相似。陈皮和化橘红的挥发油有刺激性祛痰作用，辛散温通，气香而燥，既能行肺气之壅滞，又能燥湿浊而化痰，故常用于治疗痰湿阻肺、咳嗽痰多、胸膈满闷、头目眩晕等证；当归可活血通络祛瘀［2-7］。诸药合用，宣降得宜，祛邪而不伤正，扶正而不留邪，温而不燥，润而不腻，令肺气调畅，咳嗽自止。本研究中参照文献［8-13］，以阿魏酸、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷为定量控制指标，采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法进行含量测定，可为止咳平喘合剂的质量标准研究提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司），包括G1311A系列四元泵、G1315D DAD检测器、G1316A柱温箱、G1329A自动进样器、二极管（分辨率为0.74 nm，波长精度为1 nm）；KQ-300UDB型双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率为120～300 W，频率为 45／80 kHz）；Mettle MS205DU 型电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司，精度为0.1 mg 和 0.01 mg）；Purelab FLex 3 型一体式超纯水仪（英国ELGA公司，制水符合实验室一级水要求）。

图1 高效液相色谱图

1.2 试药

阿魏酸对照品（批号为110733-201614，含量为99.0% ），芸 香 柚 皮 苷 对 照 品 （ChromaDex，批 号 为00014230-803，含量为 100.0% ），柚皮苷对照品（批号为 110722-201613，含量为 94.3%），橙皮苷对照品（批号为110721-201818，含量为96.2%），均购自中国食品药品检定研究院；甲醇（色谱纯，德国默克公司，批号为1046707 936）；冰醋酸（分析纯，四川西陇科学有限公司，批号为190610，含量不低于99.5%）；水为超纯水；止咳平喘合剂（云南省曲靖市中医医院制剂室提供，批号分别为 181003，181108，181206）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：ODS Hypersil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈 -5% 醋酸（20 ∶80，V／V）；流速：1.0 mL ／min；柱温：35 ℃；检测波长：283，323 nm；进样量：10 μL。

2.2 溶液制备

对照品溶液：取阿魏酸对照品12.40 mg，芸香柚皮苷对照品 17.20 mg，柚皮苷对照品 17.03 mg，橙皮苷对照品13.68 mg，精密称定，分别置4个10 mL容量瓶中，加甲醇使溶解，定容，摇匀，分别精密量取0.1，0.5，3.0，5.0 mL 置同一 25 mL 容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得混合对照品溶液（阿魏酸、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷质量浓度分别为 4.910，34.400，192.700，263.200 μg ／mL）。

供试品溶液：精密量取样品（批号为181003）10 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理（功率为 300 W，频率为 40 kHz）5 min，加甲醇溶解，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：按止咳平喘合剂的处方工艺，称取除陈皮、化橘红、当归以外的其他药材，按处方制备阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验及专属性考察：取2.2项下3种溶液各10 μL，按拟订色谱条件进样，记录色谱图。阿魏酸、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷的保留时间依次为8.9，11.7，14.0，17.0 min，理论板数依次为 9 211，6 238，6 507，6 167。4 种成分均分离完全，阴性对照品溶液在与混合对照品溶液相应峰处未见色谱峰出现，表明制剂中其他药物及辅料对测定无干扰。色谱图见图1。

线性关系考察：精密吸取混合对照品溶液0，1.25，2.5，5，10 mL，置 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得。按拟订色谱条件进样测定，以质量浓度（C）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标进行线性回归，得回归方程。结果见表1。

表1 4种成分线性关系考察结果

精密度试验：精密吸取混合对照品溶液，连续进样5次。结果阿魏酸、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷峰面积的RSD分别为 0.34%，1.10%，0.45%，0.29%（n＝5），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批（批号为181003）样品5份，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图。结果阿魏酸、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷含量的RSD分别为 0.36% ，0.85% ，0.82% ，0.40%（n＝5），表明方法重复性良好。

稳定性试验：依法制备供试品溶液，分别于配制后0，4，8，12，16，24，48 h 时进样测定，记录峰面积。结果阿魏酸、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷峰面积的RSD分别为 0.86%，0.82%，0.71%，0.62%（n＝7），表明供试品溶液在48 h内稳定性良好。

加样回收试验：分别量取已知含量的样品（批号为181003）5.0 mL，共 6 份，分别加入单标对照品溶液（阿魏酸 49.104 μg ／mL，芸香柚皮苷 275.20 μg ／mL，橙皮苷 658.00 μg ／mL）各 1 mL，拟订单标溶液柚皮苷（1 606.0 μg ／mL）1.5 mL，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样，并计算回收率。结果见表2。

表2 加样回收试验结果（n＝6）

2.4 样品含量测定

取3批样品，各3份，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件分别进样，记录峰面积，以外标法计算各成分含量，结果见表3。

表3 样品含量测定结果（n＝3）

3 讨论

检测波长选择：曾采用单波长283 nm检测，但供试品溶液中阿魏酸含量偏低，色谱峰偏小，故采用双波长检测，于阿魏酸最大吸收波长（323 nm）峰面积增大，利于检出，且精密度好。

流动相选择：曾采用乙腈、甲醇分别和0.1%磷酸、5%醋酸配比，最后确定流动相为甲醇-5%醋酸（20∶80，V／V），其基线平稳，主成分峰形及分离效果较好。

样品提取：先后考察了甲醇超声提取、50%甲醇超声提取及加水振摇混匀。发现3种提取方式对于主成分含量均无显著影响，考虑到样品制备与对照品溶液制备溶剂应尽可能相同，故选择甲醇为溶剂进行超声提取。

取样量确定：样品处理过程中，4种成分的含量极差稍大，经反复试验，最后确定取样量为10 mL，稀释至50 mL。

在测定过程中，样品的分离度较好，阴性样品无干扰。该方法简便、快捷、准确，可控制该处方中多味药材的质量。