马洁瑶 ，史思林 ，罗贞贵 ，欧阳敏 ，李凯琳 ，蔡 伟 ，，张在其 △

（1.湖南医药学院·侗医药研究湖南省重点实验室，湖南 怀化 418000； 2.湖南医药学院药学院，湖南 怀化 418000）

马卡列丙Duhaldea nervosa（Wallich ex Candolle）A.Anderberg为菊科旋覆花属显脉旋覆花的全草，又称小黑药、毛秀才等，广泛分布于中国湖南、贵州、云南、广西等地，在印度、尼泊尔、越南、缅甸等也有分布［1-2］。其常被制成食品香料，是缓解风湿和治疗跌打损伤的民间药物，尤其在促进骨折愈合方面有较好的功效［3］。研究表明，马卡列丙主要由甾类、萜烯类、绿原酸和挥发性成分［4-7］组成，而挥发性成分被认为是主要的活性成分［8-10］。本研究中采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱（HS-SPME-GC-MS）联用技术分析马卡列丙根和茎的挥发性成分。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Trace1300-ISQ型气相色谱-质谱联用仪（美国Thermo Scientific 公司）；Supelco 固相微萃取装置、75 μm CAR／PDMS萃取纤维头、4mL顶空瓶（美国Supelco公司）。

1.2 试药

马卡列丙Duhaldea nervosa干燥根和茎于2018年12月购于云南，经湖南医药学院侗医药研究湖南省重点实验室生药学专家汪冶教授鉴定为正品，通过基原鉴定法、性状鉴定法、显微鉴定法鉴定为菊科显脉旋覆花，根（编号为2018120401）和茎（编号为2018120402）标本存于药学院；C7-C30饱和烷烃（各组分含量为1000μg／mL，批号为LRAC0353，Sigma-Aldrich公司）。

2 方法与结果

2.1 样品制备

将75 μm CAR／PDMS固相微萃取纤维头置气相质谱的进样口，300℃老化10 min；分别取马卡列丙根、茎粉末10 mg，精密称定，置4 mL顶空瓶中密封，固相微萃取头插入密封的顶空瓶上部空间，65℃暴露30 min，吸收挥发物；将萃取头抽出，迅速插入气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）进样口，300℃解吸挥发性化合物5 min后拔出，检测获得马卡列丙根茎挥发性成分的气相色谱和质谱信息。采用相同GC-MS条件检测C7-C30正构烷烃标准品，得正构烷烃的气相色谱和质谱信息。

2.2 气相色谱-质谱条件

气相色谱条件：色谱柱为TG-5MS型5%苯基二甲基聚硅氧烷毛细管色谱柱（30 m ×0.25 mm，0.25 μm）；程序升温，初始温度50℃（保持3min），以2℃ ／min的速率升温至170℃（保持5 min），以10℃ ／min的速率升温至280℃（保持5 min）；载气为氦气（纯度为99.999%，流速为1 mL／min）；进样口温度保持300℃，分流比为50 ∶1。

质谱条件：电子电离（EI）源；电子能量为70 eV；离子源温度为280℃；传输线温度为250℃；扫描质量范围为 40～620 amu。

2.3 结果

从马卡列丙的根和茎中分别鉴定出37种和38种化学成分，根据化合物色谱峰和C7-C30正构烷烃标准品色谱峰的保留时间计算保留指数（RI）［11］，采用峰面积归一化法计算马卡列丙根和茎挥发性成分的相对含量，分别占87.65%和89.10%，详见表1。与质谱NIST17库检索匹配，对化合物色谱峰进行分析与鉴定，详见图1。

图1 总离子流图

3 讨论

马卡列丙根和茎中挥发性成分共检出化合物43种，包括烯烃类18种，酯类8种，芳香族类4种，醚类3种，醇类2种，醛类2种，酚类2种，酸类1种，醌类1种，杂环类1种，硅烷类1种，与文献［9-10］的报道挥发油主要成分基本一致。结果表明，马卡列丙根和茎中的主要成分为 thymol，isobutyrate thymol和 thymol 2-methylbutanoate，这3个成分均有较好的抗炎和镇痛作用［12-13］。对比根和茎，3种主成分在根中的百分含量均比茎中高。Thymol 2-methylbutanoate含量比文献［11］报道的高，其主要原因可能是不同采收地点引起的。

表1 马卡列丙的挥发性成分

采用HS-SPME-GC-MS联用技术分析马卡列丙的根和茎的挥发性成分，可为进一步研究马卡列丙的质量标准和药效物质基础奠定基础。