王雪，李琳，张红，张雪，王振华

（中国医科大学 1.生命科学学院生理学教研室，沈阳 110122；2.附属口腔医院干诊科，沈阳 110002）

口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）是具有高转移率和高复发率的恶性肿瘤，约占口腔癌的90%［1］。目前手术仍为主要治疗方式，但患者术后易发生转移和复发，5年生存率仅为50%［2］。因此，寻找OSCC的发病和转移机制十分重要。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一种没有编码蛋白能力的RNA。越来越多的证据表明lncRNA在OSCC的进展中发挥调控作用［3-5］。lncRNA RUNX1-IT1位于染色体21q22.12区域，长约1 502个核苷酸，研究［6-7］表明它在结直肠癌和胃癌中发挥调控作用，然而lncRNA RUNX1-IT1在OSCC中的功能和机制尚未明确。本研究通过体外实验探讨lncRNA RUNX1-IT1对OSCC增殖、迁移的影响及其作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源：收集2018年5月至2019年2月期间中国医科大学附属口腔医院颌面外科手术切除的47例OSCC癌组织和癌旁正常组织，OSCC的诊断依据组织病理学确定。标本收集前经中国医科大学附属口腔医院伦理委员会批准，并经患者知情同意。

1.1.2 细胞培养：OSCC细胞系CAL27、SCC25均购于美国ATCC细胞库。HaCaT购于中国典型培养物保藏中心细胞库。CAL27、HaCaT以DMEM高糖培养基（含有10%的胎牛血清）培养，SCC25以DMEM/F12培养基培养，培养液中加入10%胎牛血清，400 ng/mL氢化可的松，0.5 mmol/mL丙酮酸钠。细胞于37 ℃，5%CO2培养箱中培养。

1.2 方法

1.2.1 实时qPCR：用Trizol法提取组织和细胞RNA。采用PrimeScriptTMRT reagent Kit试剂盒进行反转录。利用SYBRPremix Ex Taq Ⅱ在LightCycler480Ⅱ实时 PCR仪上进行实时定量PCR反应。引物序列：lncRNA RUNX1-IT1，上游引物5’-GGACACGCAGAGGAAGT CAA-3’，下游引物5’-GTTCTTGAGGTTGGCGGAGA-3’；GAPDH，上游引物5’-CGGATTTGGTCGTATTGGG-3’，下游引物5’-CTGGAAGATGGTGATGGGATT-3’。以2-ΔΔCt法计算结果。

1.2.2 载体构建和细胞转染：过表达慢病毒载体购于上海吉玛基因公司，当CAL27细胞密度达到70%～80%时进行转染。……