王志荣 黎志立 李明艳 高紫丹 王宝华* 李长红 李文旭

（1.北京中医药大学， 北京102446； 2.北京万成吉利工贸有限公司， 北京100095）

生姜、干姜是日常生活中经常接触到的调味香料，也是传统中药，两者均被列入2015 年版《中国药典》［1］，分别为姜科姜属多年生草本植物姜Zingiber officinaleRosc.的新鲜根茎（即鲜姜）、干燥根茎，而且明确规定后者制备方法包括生姜趁鲜切片晒干、低温干燥2 种［1］。它们均有着悠久的药用历史，前者最早出现于《名医别录》，而后者始载于《神农本草经》［2⁃4］。

中医认为，姜药用以小种为好［5］，生姜性温味辛，具有解表散寒、降逆止呕、化痰止咳之功效；干姜性热味辛，有温中散寒、回阳通脉、温肺化饮之功效［6］，国内外学者对两者成分进行了广泛研究［7⁃12］，发现主要包括挥发油、姜辣素、姜烯酚、姜酮等［13］，而且随品种、批次、产地不同而有所变化［14⁃18］。前期对药材市场和产地加工企业进行调研发现，目前仍大多采用鲜切晒干法制备干姜，但关于该药材制备前后主要成分的变化却鲜有报道［9］。

生姜在我国有着广阔的种植地域［3］，它不耐寒，怕潮湿和强光直射，宜在坡地和稍阴的温暖地块栽培［19］，国内外研究者对各产地品种的化学成分及药理作用进行了研究［20］，但尚未涉及福建生姜。福建省属中亚热带季风气候，多谷地和山地，气候湿润，温度常年偏高，非常有利于姜的生长，仅邵武市种植面积就达几十万亩，当地生姜以其小种（药用价值高）、味辛辣浓（味辛说明挥发油含有量高，辣浓说明姜酚含有量高）、色纯黄、肉细嫩而逐渐被众多药材企业和当地医院重视。因此，本实验对福建鲜姜、干姜主要成分进行比较，以期为该药材质量评价和合理利用提供理论依据。

1 材料

1.1 试剂与药物 生姜采自福建省邵武市，经北京中医药大学王文全教授鉴定为姜科植物姜Zingiber officinaleRosc.的新鲜根茎 （即鲜姜）。6⁃姜辣素 （B21838）、8⁃姜酚（B21860）、10⁃姜酚对照品（B21741） 均购自上海源叶生物科技有限公司。乙腈、甲酸、石油醚均为色谱纯；甲醇为分析纯；水为娃哈哈纯净水。

1.2 仪器 见表1。

表1 仪器信息

2 方法与结果

2.1 HPLC 条件 Agilent 5TC⁃C18（2）色谱柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm），以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈（A） ⁃0.1%甲酸（B），梯度洗脱，程序见表2；体积流量0.5 mL／min；柱温30 ℃；检测波长282 nm；进样量15 μL。

表2 梯度洗脱程序

2.2 GC⁃MS 条件

2.2.1 GC 进样口温度250 ℃；载气氦气，体积流量1 mL／min；程序升温 （初始温度70 ℃，停留3 min，8 ℃／min升至170 ℃，停留4 min，10 ℃／min 升至190 ℃，停留2 min，10 ℃／min 升至250 ℃，停留3 min，10 ℃／min升至300 ℃，停留2 min）；溶剂延迟3 min；进样量0.4 μL；分流比100 ∶1。

2.2.2 MS EI 电离方式，离子源温度230 ℃；四极杆温度150 ℃；倍增电压1 247 V；发射电流34.6 μA；接口温度250 ℃；扫描范围m／z50～500；电子能量70 eV。

2.3 药材处理

2.3.1 鲜姜预处理 根据2015 年版《中国药典》 生姜项下规定，将鲜姜除去须根，软刷清除表面泥沙，水冲洗后及时用滤纸吸干表面残余水珠，称定质量后备用。

2.3.2 干姜制备 取适量“2.3.1” 项下鲜姜趁鲜切片，厚度约2～4 mm，单层平铺于不锈钢盘中，室内向阳处自然晒干，控制室内温度23～25 ℃，相对湿度40%～45%，每天日照8 h，其余时间段阴干，即得，称定质量后保存于干燥器中备用。再计算制备10 d 后干姜干燥程度［8］，公式为干燥程度＝ ［（WA-WB） ／WA×100%］ （WA为干燥前鲜姜质量，WB为干燥后干姜质量），结果达85.1%，符合2015 年版《中国药典》 相关规定，它随时间的变化曲线见图1。

图1 干燥程度随时间的变化曲线

2.4 溶液制备

2.4.1 对照品溶液 精密称取6⁃姜辣素对照品适量，置于10 mL 量瓶中，严格按照2015 年版《中国药典》 生姜项下对照品溶液制备方法进行处理，即得相应溶液（0.05 mg／mL）。同法制备8⁃姜酚、10⁃姜酚对照品溶液。

2.4.2 鲜姜供试品溶液 取适量“2.3.1” 项下鲜姜，趁鲜切成1～2 mm 小块，取约7 g，精密称定，严格按照2015年版《中国药典》 生姜项下供试品溶液制备方法进行处理，即得。

2.4.3 干姜供试品溶液 将“2.3.2” 项下干姜粉碎成粉末，取约1 g，精密称定，其他操作同 “2.4.2” 项下，即得。

2.5 挥发油得油率测定 取适量“2.3.1” 项下鲜姜，趁鲜切成4～5 mm 小块，按照2015 年版《中国药典》 中挥发油测定法（通则2204 甲法） 提取挥发油，无水硫酸钠干燥后计算其得率，结果见表3。取适量“2.3.2” 项下干姜（所取量通过折干率来换算与提取挥发油的鲜姜用量当量），捣碎成粗颗粒，按照2015 年版《中国药典》 中挥发油测定法（通则2204 甲法） 提取挥发油，无水硫酸钠干燥后计算其得率，结果见表3。

表3 鲜姜、干姜挥发油得率比较

2.6 方法学考察

2.6.1 线性关系考察 精密量取6⁃姜辣素对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL 于2 mL 量瓶中，甲醇稀释至最大刻度，摇匀，作为线性标准溶液①～⑥，在“2.1” 项色谱条件下进样测定。以溶液质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y） 进行回归，得方程为Y＝1.750 2×105X⁃146 326，在54.40～326.40 μg／mL 范围内线性关系良好（r＝0.999 2）。

2.6.2 精密度试验 取“2.7.2” 项下线性标准溶液③，在“2.1” 项色谱条件下进样测定6 次，测得6⁃姜辣素峰面积RSD 为0.46%，表明仪器精密度良好。

2.6.3 重复性试验 取“2.3.2” 项下干姜粉末共5 份，每份约1 g，按“2.4.3” 项下方法制备供试品溶液，编号①～⑤，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，测得6⁃姜辣素、8⁃姜酚、10⁃姜酚峰面积RSD 分别为2.60%、2.81%、2.60%，表明该方法重复性良好。

2.6.4 稳定性试验 取“2.7.3” 项下的⑤号供试品溶液，于0、3、6、9、12、15、18、21、24 h 在“2.1” 项色谱条件下进样测定，测得6⁃姜辣素、8⁃姜酚、10⁃姜酚峰面积RSD 分别为0.44%、0.94%、1.53%，表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

2.7 含有量测定 精密吸取6⁃姜辣素对照品溶液及鲜、干姜供试品溶液各15 μL，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，色谱图见图2。计算6⁃姜辣素含有量，并根据2015 年版《中国药典》 中相对保留时间及校正因子（表4） 计算8⁃姜酚、10⁃姜酚保留时间和含有量。为了进一步验证，再精密吸取8⁃姜酚、10⁃姜酚对照品溶液，在不改变色谱条件的前提下得到色谱图（图3）。6⁃姜辣素、8⁃姜酚、10⁃姜酚含有量测定结果见表5。

图2 6⁃姜辣素HPLC 色谱图

表4 各成分相对保留时间及校正因子

由图2 可知，在对照品保留时间（约27 min） 处2 种供试品均有相应色谱峰出现，分离度良好。由图3 可知，8⁃姜酚、10⁃姜酚保留时间分别约为40、60 min，与2015 年版《中国药典》 接近。图2A～2B 显示，在约44 min 保留时间处有一明显色谱峰，但在文献中却未见报道，《中国药典》中也无说明，今后将鉴定其结构，探究它是否为福建姜所特有。由表5 可知，当量干姜中姜酚类成分含有量明显高于鲜姜中，可能与制备过程有关，前者经鲜切晒干工艺后一些成分发生转化，这也是后续需要研究的内容。

2.8 挥发油成分分析 取“2.5” 项下2 种挥发油，石油醚（60～90 ℃） 定容至5 mL，在“2.2” 项条件下进样分析，在鲜姜、干姜挥发油中共鉴定出125 种成分，总离子流图分别见图4。其中，鲜姜挥发油中鉴定出72 种，占总成分相对含有量的97.596%；干姜挥发油中鉴定出97 种，占总成分相对含有量的98.06%，具体见表6。

图3 8⁃姜酚、10⁃姜酚HPLC 色谱图

表5 各成分含有量测定结果

由此可知，鲜姜、干姜挥发油中成分种类及其相对含有量存在明显差异，两者共有成分44 种，其中相对含有量大于等于1% 的有14 种，大于5% 的有莰烯 （6.81%、5.66%）、桉叶素 （12.09%、9.60%）、2，6⁃辛二烯醛⁃3，7⁃二甲基 （Z）（9.15%、7.40%）、香叶醇 （5.71%、5.35%）、2，6⁃辛二烯醛⁃3，7⁃二甲基 （E）（11.7%、9.81%）；鲜姜挥发油中相对含有量大于等于1%的成分有20 种，其中特有成分有6 种；干姜挥发油中相对含有量大于等于1%的成分有27 种，其中特有成分有12 种；鲜姜挥发油中1，3⁃环己二烯⁃5⁃ （1，5⁃二甲基⁃4⁃己烯基） ⁃2⁃甲基，［S（R*，S*）］ 含有量较高（5.29%），但在干姜挥发油中未检测出；干姜挥发油中2⁃茨醇含有量较高（7.88%），但在鲜姜挥发油中未检测出。

综上所述，干姜挥发油中各成分相对含有量整体上低于鲜姜挥发油中，但种类明显增加，可知后者性质很不稳定，经鲜切晒干制成前者后许多成分种类及其相对含有量均发生了变化，具体原因还有待进一步研究。

3 讨论

本实验在2015 年版《中国药典》 “生姜” 项色谱条件下分析干姜，发现其分离度、精密度、稳定性良好，重复性高，可用于含有量测定和分析，也使后续考察更有可比性和研究价值。由此建议，可简化《中国药典》 有关干姜含有量测定的色谱内容，从而有利于进行鲜姜、干姜的对比研究和质量控制。

图4 挥发油总离子流色谱图

表6 挥发油成分鉴定结果

续表6

续表6

结果显示，福建鲜姜、干姜中6⁃姜辣素、8 姜酚、10⁃姜酚含有量均显著高于《中国药典》 标准，而且与现有文献报道相比，在相同处理条件下也有明显优势；通过考察挥发油得率和颜色发现，福建生姜较其他产地品种更理想，可能是由于当地地理、气候环境等因素所致，也可为该资源开发和利用提供参考；鲜姜中主要成分含量低于干姜中，但挥发油含有量更高，挥发油成分种类及相对含有量也有显著变化，并且无明显规律性，可能是由于鲜切晒干制备工艺导致该成分部分损失，同时一些成分之间相互转化也影响了相对含有量。由此证明，同一产地、品种、批次福建鲜姜、干姜中主要成分含有量存在明显差异，与中医应用两者时区别对待相契合，也为后续相关研究提供思路。