李自良， 王家敏， 赵彩红， 王美皓， 李 倬， 乔自林， 马忠仁

(1. 西北民族大学 生物医学研究中心 甘肃省动物细胞技术创新中心， 兰州 730030 2. 西北民族大学 生物医学研究中心 生物工程与技术国家民委重点实验室, 兰州 730030 3. 西北民族大学 生命科学与工程学院， 兰州 730030)

MDCK(Madin-Daby Canine Kidney, MDCK)细胞由Madin和Darby于1958年从美国Cocker Spaniel母曲架犬肾脏组织分离培育建立[1]。由于其病毒感染效率高、增殖快，且不易变异，是公认的适于流感病毒复制的3种细胞系之一[2]。我国流感疫苗和禽流感疫苗生产主要采用鸡胚生产工艺，但鸡胚生产工艺存在生产周期长、操作繁琐、工作量大、易污染等诸多缺陷，如遇禽流感大规模暴发，鸡胚的供应存在很大问题[3-5]。若采用传代细胞生产疫苗的工艺，将不受鸡胚等天然因素的限制，且生产周期短，工艺简单，如遇流感暴发会快速反应，短时间内可提供大量疫苗产品[6-8]。另外，贴壁型的传代细胞可用细胞工厂规模化培养，生产中可将细胞生长和病毒繁殖控制在最适条件范围内，提高细胞密度和病毒滴度，实现大批次量、小批间差，产品具有更好的稳定性和安全性，大量节省劳动力、生产场地和能源消耗，降低生产成本，与鸡胚直接增殖病毒的细胞工厂培养细胞增殖病毒的工艺相比具有明显优势[9-11]。血清具有终止胰蛋白酶消化，提供细胞生长所需的贴壁因子、免疫球蛋白、胰岛素等其他营养物质。在动物血清中牛血清又是最常用、最合适、最有效的培养基成分。在培养基中加入适量的牛血清，不仅可以有效促进细胞的生长繁殖，还能够缩短细胞的生长周期，从而加快疫苗的生产，提高疫苗的产量，为疫苗生产企业带来更多的利益[21]。……