吴大英 张秀艳 李 霞 郭予武

(1深圳市龙岗中心医院；2深圳市龙岗区中医院 广东深圳 518115)

卵巢癌是女性生殖道最常见的恶性肿瘤之一， 其发病率呈逐年上升趋势， 是严重危害人类健康的一类疾病。MiR-338是肿瘤抑制基因，以往的实验结果表明卵巢癌组织MiR-338 mRNA 呈低表达，并且与临床分期、组织分型及淋巴转移有密切关系[1]，且卵巢癌易发生早期侵袭转移，是患者术后高复发乃至死亡的主要原因。MiR-338作为一个肿瘤转移抑制基因，在很多肿瘤的侵袭转移过程中起重要作用，国内外部分学者发现其与肿瘤转移抑制作用存在相悖[2]。深入研究MiR-338基因的表达与卵巢癌侵袭、转移及预后的关系很有必要。抗体是研究免疫分子的重要工具，目前市场上尚未见有商品化的针对MiR-338特异性抗体。课题组通过PCR扩增获取了MiR-338编码区基因，表达其重组蛋白，制备其特异性抗体，同时提出了其应用ELISA方法检测卵巢癌病人血清的可能性。

1材料和方法

1.1材料

卵巢癌组织来自深圳市龙岗中心医院妇产科手术室。大肠杆菌DH5α、大肠杆菌DL21(DE3)为本室保存。雄性新西兰大白兔由深圳市龙岗中心医院实验动物中心提供。克隆载体pGEM-T、反转录试剂盒为Promega公司产品。RNA 提取试剂、表达载体pET28和Ni2+-NTA 凝胶为Invitrogen公司产品。Taq酶和限制性内切酶为大连宝生物工程公司产品。PCR产物回收、质粒纯化试剂盒为QiaGen公司产品。IPTG及DAB购自上海生物工程有限公司。HRP标记的羊抗兔IgG 为Dako公司产品。PVDF膜为美国PALL公司产品。常规试剂为国产分析纯。PCR引物合成及DNA序列测定委托上海生物工程公司完成。……