乔芳 田亚娟 王远花 赵倩 何路军 王振雷

目前，在人类36个红细胞血型系统中，Rh血型系统是最复杂的，ABO血型系统仅次之，其与临床上与输血相关的疾病，例如新生儿溶血病、溶血性输血反应等关系密切[1]。在Rh血型系统中，包括5种血型抗原，即C、c、D、E、e抗原；其中免疫原性以D抗原最为强烈[2]。依据红细胞上有无D抗原的情况，将人类红细胞分为 RhD阳性与RhD阴性，即红细胞上缺乏D抗原则为RhD阴性；相反，存在D抗原的红细胞为RhD阳性。在中国人群中，大约占0.3%～0.5%的个体是RhD阴性。大多数D抗原采用盐水法即可检出，盐水法检测仅有少数结果为阴性，而采用间接抗人球蛋白（IAT）方法方可检出阳性，称该表型为 RhD变异型。RhD抗原包括多种变异型，按照 RhD抗原在红细胞上质和量的变化不同，将其分为弱D、部分D和Del型，统称为D变异型[3]。本研究采用阴性确认实验检测出弱D抗原，再分析D基因存在情况，进一步通过测序分析探讨RhD变异型的分子背景。

资料与方法

1 研究对象 血清学实验检出的D变异型（弱D或部分D）标本107例。

2 试剂与仪器 三批抗-D血清来源分别是IgM+IgG抗-D1(IMMUCOR，批号：517097)，IgM+IgG抗-D2(MILLIPORE，批号：BMA1402C)， IgG抗-D3（上海血液生物医药有限公司，批号：20150128）、抗-C（上海血液生物医药有限公司，批号：20143005）、抗-c（上海血液生物医药有限公司，批号：20153101）、抗-E（上海血液生物医药有限公司，批号：20153201）和抗-e（上海血液生物医药有限公司，批号：20153302）。TaqDNA聚合酶（PROMAGA，0000175632）；人类红细胞RhD血型-弱D（部分D）基因分型试剂盒（天津秀鹏生物技术公司，201603013，201603012）。仪器包括细胞洗涤离心机（ultracw）、医用低速离心机（珠海贝索生物技术有限公司，2005-2）、PCR扩增仪（ABI）、凝胶成像系统（KST-5500）、测序仪3730（ABI）。……