俸婷婷 杨顺龙 孙悦 林冰 周英 赵致

【摘 要】   目的： 研究黔产黄精的产地加工炮制一体化技术。 方法： 以多糖、醇浸物及水浸物含量等为指标，结合指纹图谱分析及小鼠抗疲劳试验，将不同的一体化技术与传统技术进行对比研究。 结果： 一体化技术先烫后切方法与传统技术相当或略优。 结论： 黔产黄精的产地加工炮制一体化技术具有一定的合理性和可行性。

【关键词】  黔产黄精;产地加工炮制一体化;指纹图谱分析;抗疲劳

【中图分类号】R283.3   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2020）11-0027-05

Study on Integrated Technology of Original Oroducing and Processing of Polygonatum Cyrtonema Hua in Guizhou

FENG Tingting1，2 YANG Shunlong2 SUN Yue2 LIN Bing1，2* ZHOU Ying1，2 ZHAO Zhi2

1.School of Pharmacy in Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025，China;

2. Research and Development Center of Traditional Chinese Medicine and Natural Medicine in Guizhou University， Guiyang 550025，China

Abstract：  Objective  To study the integrated technology of original producing and processing of Polygonatum Cyrtonema Hua in Guizhou.  Method  The integrated technology and traditional technology were compared by the content determination of polysaccharide， alcohol-soluble extractives and water-soluble extractives. HPLC fingerprint analysis and anti-fatigue test were also applied.  Result  The method of the integration technology， which was called “scalding before cutting”， was comparable with or little better than the traditional technology.  Conclusion  To some extent， the integrated technology of original producing and processing of Polygonatum Cyrtonema Hua in Guizhou is reasonable and feasible.

Key words： Polygonatum Cyrtonema Hua in Guizhou; Integrated Technology of Original Producing and Processing; Fingerprint Analysis; Anti-fatigue

黄精为百合科植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll. et Hemsl.、黄精Polygonatum sibiricum Red.或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎，补气养阴、健脾、润肺、益肾，用于脾胃气虚、体倦乏力、胃阴不足、口干食少、肺虚燥咳、劳嗽咳血、精血不足、腰膝酸软、须发早白、内热消渴[1]。黄精历代入药生制兼用，但传统以黄精生用“刺入咽喉”，故多炮制后入药[2]。2015版《中华人民共和国药典》（一部）收载的黄精加工方法为采挖后除去须根，洗净，置沸水中略烫或蒸至透心，干燥;飲片的炮制方法为除去杂质，洗净，略润，切厚片，干燥[1]。

《中华本草苗药卷》收载黄精，又名ghok naol jad（贵州毕节）、shand ghunx（贵州松桃）、kid vud（贵州黔东南）、kid oub（贵州黔南），加工方法为挖起根茎后去掉茎秆，洗净泥沙，除去须根和烂疤，蒸到透心后，晒或烘干。《贵州中草药名录》记载能润肺养阴、健脾益气、祛痰、止血、消肿解毒;《苗族药物集》记载能补虚止咳，恢复视力;《贵州民间药物》记载能止咳，接骨[3]。

近年来，随着药材规范化种植的推行，可以把药材的产地加工和炮制集中在一起，从而达到降低加工成本和提高饮片质量的目的[4]。本研究对黔产黄精的产地加工和炮制一体化进行研究，通过化学等量性研究及初步的生物等效性研究，初步探讨黔产黄精产地加工炮制一体化技术的合理性及可行性。

1 仪器与材料

FA2004分析天平（上海良平仪器仪表有限公司）;0027391数显恒温水浴锅（江苏省金坛市环保仪器厂）;SHZ-95B型循环水式多用真空泵（上海予正仪器设备有限公司）;GZX-9146MBE数显鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）;HY-0413型中药粉碎机（环亚天元机械技术有限公司）;UV-1801型紫外分光光度计（北京瑞利分析仪器有限公司）;Agilent 1260高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）。

无水乙醇、浓硫酸（重庆川东化工化学试剂有限公司，分析纯）;蒽酮（天津市科密欧化学试剂有限公司，分析纯）;乙腈（Fisher公司，色谱纯）;葡萄糖标准品（中国食品药品检定研究所，1501123）;黄精（贵州大禹王农业发展有限公司），经贵州大学熊新源教授鉴定为黄精属植物多花黄精Polygonatum Cyrtonema Hua的干燥根茎;清洁级昆明种小鼠（重庆腾鑫生物技术有限公司，SCXK（渝） 2012-0008）。

2 方法与结果

2.1 黄精加工炮制方法 在传统方法中，黄精的产地加工和炮制是分开进行的，共需要9个步骤，如图1所示。而产地加工炮制一体化技术则只需要5个步骤，其中主要是减少了1次洗净和1次干燥等易使有效成分流失的步骤，如图2所示。黄精在产地加工过程中需“略烫或蒸至透心”，前期研究发现烫制方法具有处理时间短、方法简单且综合评分较高等优点，故本研究中选取烫制方法，设立“先切后烫”及“先烫后切”两种一体化技术。[JP]

2.2 黄精多糖的含量测定[1]

2.2.1 葡萄糖标准曲线的绘制 精密称取无水葡萄糖标准品25 mg，参照2015年版《中华人民共和国药典》（一部）黄精中对照品溶液的制备方法，制备葡萄糖对照品溶液，并绘制标准曲线。得葡萄糖标准曲线方程为A=11.691C+0.11167，R2=0.9995，表明在葡萄糖浓度在0.0125～0.075 mg·mL-1之间呈良好的线性关系。

2.2.2 多糖含量的测定 精密称取黄精样品，参照2015年版《中华人民共和国药典》（一部）黄精中多糖的测定方法，测定3种加工炮制方法黄精中多糖的含量，重复3次，结果取平均值，并按式（1）计算一体化技术相对传统技术的变化率，结果见表1。一体化技术先烫后切组的黄精多糖含量略高于传统技术组，但一体化技术先切后烫组的黄精多糖含量低于传统技术组。

变化率（%）= Ai-A0 A0 ×100% （1）

式中，Ai为一体化技术的含量测量值，A0为传统技术的含量测量值。

2.3 黄精醇浸物的含量测定[5-6] 精密称取黄精样品，参照2015年版《中华人民共和国药典》（四部）热浸法测定3种加工炮制方法黄精中醇溶性浸出物含量，重复3次，结果取平均值。并按式（1）计算一体化技术相对传统技术的变化率，结果见表1。一体化技术的黄精醇浸物含量均高于传统技术组，但变化率均小于3%。

2.4  黄精水浸物的含量测定[5-6] 精密称取黄精样品，参照2015年版《中华人民共和国药典》（四部）热浸法测定3种加工炮制方法黄精中水溶性浸出物含量，重复3次，结果取平均值。并按式（1）计算一体化技术相对传统技术的变化率，结果见表1。一体化技术先烫后切组的黄精水浸物含量与传统技术组相当，一体化技术先切后烫组的黄精水浸物含量略低于传统技术组。

2.5 不同加工炮制方法黄精的高效液相指纹图谱分析

2.5.1 供试品溶液的制备[7] 取干燥至恒重的黄精样品粉末2 g，加70%的乙醇50 mL，超声提取30 min，放冷，抽滤，滤渣用同样方法再次提取，合并2次提取液，旋干。加10 mL甲醇溶解，加入10 g·L-1的壳聚糖冰醋酸溶液100 μL，放过夜，用0.22 μm滤膜滤过后，滤液作为供试品溶液。

2.5.2 色谱条件[7] 安捷伦1260高效液相色谱仪，ZORBAX SB-C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈（A，下文用体积分数）和水（B）为流动相，采用二元梯度洗脱，梯度程序为0～10 min，5%～10%A;10～30 min，10%～35%A;30～40 min，35%～60%A;40～60 min，60%～100%A。流速1 mL·min-1，柱温30 ℃，进样量10 μL。检测波长分别设定为210、254、270及290 nm。

2.5.3 高效液相指纹图谱分析[8-9] 将黄精的指纹图谱峰在2～20 min 共有指纹区进行统计，在210、254、270及290 nm波长下，从3组样品图谱的共有指纹区分别标定了11、8、9及9个共有峰，如图3所示。采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A）”进行数据分析，设定传统技术组（S0）为参照图谱，将先切后烫组（S1）和先烫后切组（S2）的色谱峰与参照图谱进行自动匹配，见表2。各加工方法所得黄精指纹图谱之间的相似度均在0.90以上。并按式（2）计算一体化技术共有峰面积与称样量比值对传统技术的变化率。结果见表3。一体化技术与传统技术比较，其变化率的平均值均为正值，表明与传统技术相比，一体化技术能够更大程度保留黄精中的成分，减少成分流失，并且先烫后切组明显优于先切后烫组。

变化率（%）= Si/mi-S0/m0 S0/m0  （2）

式中，Si为一体化技术测得的峰面积;mi为一体化技术试样质量;S0为传统炮制技术测得的峰面积;m0为传统炮制技术试样质量。

2.6 不同加工炮制方法黄精的抗疲劳作用研究[10-11]

選取体重在18～22 g之间的雄性小鼠40只，随机分为4组，即空白对照组、传统技术组、先切后烫组和先烫后切组。传统饮片组、先切后烫组和先烫后切组每只每天以5 g·kg-1黄精提取液灌胃给药，空白组每天给予相同体积的蒸馏水，连续给药10 d。末次给药后30 min后，在鼠尾根部系上质量为小鼠体重6%的重物，置于水深25 cm、水温25 ℃的水箱中游泳，记录小鼠游泳至力竭沉没后10 s仍不能浮出水面的时间作为小鼠力竭性游泳时间，结果见表4。三种加工炮制方法得到的黄精提取液均能明显延长小鼠负重游泳时间（P<0.01），与空白对照组相比，一体化技术的先烫后切组延长时间最长，并略优于传统技术组，先切后烫组延长时间较短。