赵雅芝，潘 巧，王显兵，郝文君，刘 桐，王秀梅*，辛九庆*

（1. 吉林农业大学 动物科学技术学院，吉林 长春 130118；2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病创新团队，黑龙江 哈尔滨 150069）

牛支原体（Mycoplasma bovis，M. bovis）是现有的最小的原核微生物，无细胞壁，可以通过0.22 μm滤器[1]，是一种宿主特异性粘膜常在菌，感染能够引起犊牛的肺炎、关节炎及奶牛乳房炎等疾病[2]，且常常与其它病原体混合感染导致病情复杂持久不愈，是危害我国养牛业健康发展的重要因素之一。支原体表面有丰富的脂质相关膜蛋白（Lipid-associated mem⁃brane proteins，LAMPs），其能够介导支原体黏附感染宿主，调节宿主的免疫系统[3]，其通过与TLRs 相互作用在炎症反应的起始中起重要作用[4]。本研究从前期获得的转录组测序数据中[5]，分析了M.bovis LAMPs 刺激前后EBL 细胞差异表达的基因，发现M. bovis LAMPs 刺激后EBL 细胞上调表达TRIM9 基因。TRIM9 基因属于三结构域蛋白（Tripartitemotif，TRIM）家族，该家族蛋白存在于所有多细胞动物体内，目前包含70 多个成员。越来越多的证据表明，许多TRIM 家族蛋白与抗感染免疫相关[6]。最近有文献报道TRIM9 与NF-κB 信号通路的调控相关[7-8]。而以前的文献报道表明M.bovis LAMPs 能够通过NF-κB信号通路诱导EBL 细胞释放IL-1β[9]。为探究TRIM9基因在M.bovis LAMPs 刺激EBL 细胞释放IL-1β中的作用，本研究构建TRIM9 基因过表达和敲低的EBL细胞模型，采用qPCR，ELISA 和western blot 等试验方法，解析了TRIM9 基因在M.bovis LAMPs 诱导EBL细胞释放IL-1β中积极调控的作用，为宿主基因调控M.bovis LAMPs 诱导的天然免疫应答机制提供理论依据，同时也为后期疫苗研发奠定基础。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料M.bovis 牛2c 株、EBL 细胞、M.bovis LAMPs、NP-40、pEGFP-C1 质粒均由本实验室保存；……