俞 燕，周 生，李建梅，高明燕，程 旭，姜 逸，赵秀美，徐 步

（中国农业科学院 家禽研究所，江苏 扬州 225125）

禽白血病是垂直传播性疾病，控制该病最有效的措施是对鸡群进行种源净化。主要通过对种鸡核心群定期进行外源性禽白血病病毒（Avian leukosis vi⁃rus，ALV）检测，及时淘汰阳性鸡，建立无外源性ALV 感染的种鸡群。因此，高效、快速、便捷的检测方法有助于控制ALV 的传播。国内外对ALV 的检测和鉴定方法主要有病毒分离、酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光试验（IFA）及基于PCR 的分子生物学检测技术等[1-5]。病毒分离方法最可靠，但检测周期长，需要结合其它方法才能鉴定亚群。群特异性抗原ELISA 检测方法在我国临床上应用最广，操作相对简便，有商品化试剂盒可以使用，但不能区分内源性和外源性ALV。IFA 比较直观，但需要用到特异性单克隆抗体。针对ALV 的PCR 方法已有报道，但多为鉴定一种亚群的单一PCR 或荧光定量PCR[6-8]。多重PCR 可在同一体系中同时扩增多个目的基因，节省时间和成本，检测效率显著高于单一PCR。已有报道建立了针对ALV-A、ALV-B 和ALV-J 的多重PCR 方法[9-10]，但对于目前新鉴定且在黄羽肉鸡和地方品种鸡中广泛流行的ALV-K 并未涉及。鉴于此，本研究拟建立一种能同时检测主要流行亚群ALV-A、ALV-B、ALV-J 和ALV-K 的多重PCR 方法，为禽白血病流行病学调查及外源性ALV初步鉴定提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料ALV-A 分离株JS15AJH03、ALV-B 分离株JS15BJ01、ALV-J 分离株JS15YXB01和ALV-K 分离株JS17LK01 均为本实验室在开展禽白血病净化中分离所得，并经env 基因测序鉴定。对内源性ALV 有抵抗力的鸡成纤维细胞系DF-1，为本实验室传代并保存。……