李洋，姚立琼，刘志武，梁帅龙，韦小宝，刘旭升，颉晓玲(1.兰州大学第一医院a.检验科，b.中心实验室，兰州730000；.兰州大学第一临床医学院，兰州 730000)

艰难梭菌(Clostridiumdifficile)是一种革兰阳性厌氧芽胞杆菌，可引起腹泻、伪膜性肠炎、中毒性巨结肠甚至败血症等严重临床感染。艰难梭菌毒素A(TcdA)和毒素B(TcdB)是该菌的主要致病因素[1]。在欧美国家，艰难梭菌的流行已成为影响公共卫生的一大挑战，造成了严重的经济负担[2]。艰难梭菌流行病学研究可采用PCR核糖体分型(PCR-ribotyping)、脉冲场凝胶电泳(pulse-field gel electrophoresis，PFGE)、多位点序列分型(multilocus sequence typing，MLST)及序列测定等方法。核糖体分型是欧洲艰难梭菌参比实验室分型标准方法，实验条件要求低，经济实用，可快速判断艰难梭菌是否暴发流行。在北美及欧洲地区多次暴发流行的核糖体分型027型产毒型艰难梭菌[3]，近年来在国内也有报道[4]。本研究旨在了解本院腹泻患者艰难梭菌感染现状，明确艰难梭菌产毒情况，同时对分离菌株进行核糖体分型，探讨菌株流行病学特点。

1 材料及方法

1.1标本收集 收集2019年5月至10月兰州大学第一医院161例住院腹泻患者(腹泻次数≥3次/d)的粪便标本，其中男性102份，女性59份。

1.2主要仪器与试剂 S1000型PCR扩增仪、Gel Doc XR凝胶成像仪(美国Bio-Rad公司)，Vitek MS基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(法国生物梅里埃公司)；艰难梭菌选择培养基(chromIDTMC.difficileagar，CDIF)、哥伦比亚血琼脂平板、厌氧产气袋(法国生物梅里埃公司)，粪便细菌基因组DNA提取试剂盒(天根生化科技公司)，Premix Taq酶、100 bp DNA ladder marker(TaKaRa公司)；引物由南京金斯瑞公司合成；艰难梭菌标准株ATCC 43255和ATCC BAA-1870由江苏省人民医院刘根焰教授惠赠。……