刘茹凤，石继春，王春娥，李康，李江姣，徐潇，徐颖华，辛晓芳，叶强(中国食品药品检定研究院细菌多糖和结合疫苗室(医学细菌保藏研究中心)，卫生部生物技术产业鉴定方法及其标准化重点实验室，北京 102629)

肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae,KP)可引起败血症、肺炎、泌尿系统感染、手术部位感染和导管相关性感染等院内感染[1-2]，也可造成化脓性肝脓肿等社区获得性感染[3]。荚膜是KP主要的毒力因子之一，目前鉴定有80多个荚膜血清型，其中K1、K2、K5、K20、K54、K57型与人类各种侵袭性感染密切相关，称为高毒力荚膜血清型KP[4-5]。中国医学细菌保藏管理中心(National Center for Medical Culture Collections，CMCC)收集保藏的KP主要用作生物安全评估的参考菌种和KP国家参考品的制备，参考品用于KP相关诊断试剂的质量控制，因此参考品菌株及候选菌株的质量控制尤为重要。本研究对CMCC收集保藏的KP进行了鉴定验证和分子生物学的初步分析。

1 材料和方法

1.1菌株来源 20株KP均由CMCC提供，菌株编号分别为CMCC(B)46102、46103、46104、46105、46107、46108、46109、46110、46111、46113、46114、46115、46116、46117、46118、46120、46121、46122、46123和46124。

1.2主要仪器与试剂 Vitek 2 Compact 全自动微生物分析系统(法国生物梅里埃公司)，飞行质谱仪microTyper MS及配套试剂甲酸、乙腈、基质α-氰基-4-羟基肉桂酸(α-cyano-4-hydroxycinnamic acid，HCCA)(江苏天瑞公司)，培养箱(上海印溪公司)，T100基因扩增仪、水平电泳仪、凝胶成像分析系统(美国Bio-Rad公司)，高速冷冻离心机(Eppendorf公司)；普通琼脂培养基和普通营养肉汤(美国BD公司)，DNeasy Blood & Tissue Kit(德国QIAGEN公司)，Premix Taq试剂、DNA marker DL2000、DL1000(大连宝生物公司)，琼脂糖(美国Promega公司)，引物由上海英潍捷基公司合成。

1.3拉丝试验 用接种环挑起琼脂平板上过夜培养新鲜菌落，重复2次，若2次均有黏液丝形成并且长度大于5 mm，则判为拉丝试验阳性，即该菌株为高黏液(hypermucoviscosity，HMV)表型KP[6]。……