超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱法测定乳清蛋白粉中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白
2020-08-03郑云鹏董洪涛张凤霞
杜 娟,郑云鹏,董洪涛,张凤霞*
(1.黑龙江飞鹤乳业有限公司集团实验室,北京 100015;2.飞鹤(龙江)乳品有限公司,黑龙江 齐齐哈尔 161100)
α-乳白蛋白(α-La)是乳清蛋白中主要的优质蛋白,主要存在于哺乳动物的乳汁中,能作为载物与钙、镁、锰、钠、钾以及锌结合[1-2],约占乳清蛋白的10%~20%[3-5],在牛乳中占总蛋白质的2%~3%,在母乳中占总蛋白质的20%~25%[2]。α-La能提供最接近母乳的氨基酸组合,促进婴儿的大脑发育,同时还提高蛋白质的生物利用率,降低蛋白质总量,从而有效减轻肾脏负担。β-乳球蛋白(β-Lg)是牛乳中的主要乳清蛋白,约占牛乳总蛋白的10%,占乳清蛋白的40%~50%[6-9]。据报道,近两年全国婴幼儿配方乳粉产量约90万吨,其原料绝大多数为牛乳,并且添加了脱盐乳清粉、乳清蛋白粉、浓缩乳清蛋白粉等蛋白类原料来调整蛋白质比例,使其接近母乳水平[10]。据估算乳清粉类原料用量约为婴幼儿配方乳粉产量的8%~25%,因此乳清蛋白粉的品质优良至关重要。而乳清蛋白粉中α-La和β-Lg的含量是衡量其品质的关键指标。
目前,α-La和β-Lg含量检测的报道较少,已有方法有凝胶色谱法[11]、高效液相色谱法[12-13]、毛细管电泳法[14]、液相色谱-质谱联用法[15-17]、酶联免疫法(ELISA)[18]等。然而,目前的检测方法主要是针对婴幼儿配方奶粉、牛乳等样品基质。而针对乳清蛋白类原料等的分析研究主要停留在总蛋白含量测定水平上,尚无相应的标准方法检测α-La和β-Lg含量,已有的反相高效液相色谱法特异性较差[10],不可避免地产生了乳清蛋白粉的监管盲区。针对上述情况,本研究基于三重四极杆质谱MRM/SRM定量思路的靶向蛋白质组学技术,利用蛋白专属的肽段序列完成定量分析。……
