李宗国，任春艳，苏希东，李爱平，时召平

(河北省承德市中医院药学部，河北 承德 067000)

功能失调性子宫出血(简称功血)是发生于女性各年龄阶段的常见病、多发病、疑难病，是由多种原因引起的下丘脑-垂体-卵巢轴功能失调而导致子宫内膜增生过长，从而造成子宫异常出血[1]。功血可引起失血性贫血、继发感染、不孕等，给患者带来极大的痛苦。目前西医对该病的药物治疗主要有雌激素和促排卵药物，副作用大且疗效不佳，病情反复。研究表明[2,3]长期应用雌激素或促排卵药物会增加患子宫内膜癌或卵巢癌的风险。功血属祖国传统医学“崩漏”的范畴，中医药治疗功血具有独特的法则和疗效[4]。中医对崩漏(功血)的辨证施治一惯沿用“塞流，澄源，复旧”的法则。出血期以活血化瘀法为主塞流，同时根据不同致瘀原因随证治之；血止之后注重澄源求因，复旧善后，再结合女性月经周期不同阶段的生理特点，在经前期理气活血，以使气血通调，在经后期滋肾养血，以使血海充盈，从而使患者恢复正常的月经周期，在临床上取得良好的疗效。自拟妇血安汤是在中医药理论指导下以艾叶、当归为君药，配伍益母草、延胡索、炙甘草、川芎、白芍，具有活血止血，行气止痛功效。临床研究表明自拟妇血安汤能促进子宫收缩，改善血液流变学，对治疗产后血瘀型恶露不止具有显著疗效。本研究观察了自拟妇血安汤对功能失调性子宫出血大鼠模型的作用，及对大鼠凝血功能的影响，为临床应用提供实验基础。

1 动物与试剂

1.1实验动物:雌性Wistar大鼠，SPF级，体重220～250g。雄性Wistar大鼠，SPF级，体重250～300g。购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2012-0001。

1.2实验药物:米索前列醇片(批号:c024180802)和米非司酮片(批号:c019150302)均购自北京紫竹药业有限公司。宫血宁胶囊(批号：1806233)购于云南白药集团股份有限公司。自拟妇血安汤：艾叶20g、当归20g、醋延胡索15g、益母草30g、川芎12g、炙甘草6g、白芍20g，饮片由承德市中医院提供，自煎。

1.3试剂:雌二醇放射免疫试剂盒、孕酮放射免疫试剂盒、黄体生成素放射免疫试剂盒和卵泡刺激激素放射免疫试剂盒均购自北方生物技术研究所。

1.4仪器:北京医用LG15-W 高速微量离心机；美国Bio-Rad500酶标仪；日本日立全自动生化分析仪7600；AMAX-200全自动血凝分析仪。

2 方 法

2.1制作功能失调性子宫出血大鼠模型与分组:参考文献[5]，将大鼠按母(不少于50只)∶公为2∶1～3∶1的比例合笼，次日进行阴道涂片检查，若发现精子或阴栓表示受孕成功，作为妊娠第1天；若未受孕，待下次继续合笼受孕。取受孕成功的母鼠50只，采用随机数字表法分为5组，每组10只，分别为空白组、模型组、阳性对照(宫血宁胶囊)组和自拟妇血安汤低、高剂量组。除空白组外，其余各组大鼠分别于妊娠第7天ig米非司酮溶液(上午8：00，8.5mg/kg)和米索前列醇溶液(下午18：00，0.1mg/kg)，造成早孕大鼠不完全流产的功能失调性子宫出血模型；同时于母鼠阴道内置入消毒棉球，吸收子宫出血物，次日分别于早、晚将棉球取出，放入封口袋中，于4℃冰箱冷藏保存，每天更换2次新棉球，直至妊娠第14天。

2.2给药:从妊娠第8天开始，宫血宁胶囊组大鼠ig宫血宁胶囊0.07g/kg(蒸馏水溶解，按临床的等效剂量换算而得)；自拟妇血安汤低、高剂量组大鼠分别ig自拟妇血安汤15g/kg、30g/kg(分别按临床剂量的2倍、4倍换算而得)；空白组和模型组大鼠ig等体积(5mL)的蒸馏水，每天早、晚各给药1次，连续7d。

2.3观察指标

2.3.1出血时间与凝血功能指标的测定[6]:大鼠妊娠第14天，末次给药后30min，固定大鼠，测定鼠尾长度并标记。用剪刀在尾尖3mm处横断，血液自行溢出，隔30s用滤纸吸去血滴1次。记录血液自然停止(滤纸吸时无血)的时间，即为出血时间。大鼠妊娠第14天，末次给药后1h，1%戊巴比妥钠麻醉，取腹主动脉血2mL。加入有抗凝剂的试管中，充分摇匀，2000r/min低温离心15min，分离血清。用全自动血凝分析仪测定凝血酶原时间(PT)，凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)的值。

2.3.2血清性激素水平的测定:大鼠妊娠第14天，末次给药后1h，1%戊巴比妥钠麻醉，取腹主动脉血。静止30min后，2000r/min低温离心15min，分离血清。采用放射免疫分析法测定血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)、卵泡刺激激素(FSH)和黄体生成素(LH)水平。

2.3.3子宫和卵巢指数的测定:大鼠取血后，脱颈椎处死，剖取子宫、卵巢。用滤纸吸干脏器，采用电子天平精密称重，采用如下公式计算：脏器指数=脏器重量(mg)/大鼠质量(g)。

3 结 果

3.1自拟妇血安汤对大鼠出血时间与凝血功能指标的影响:结果表明，与空白组相比，模型组大鼠出血时间明显缩短，凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)有所增长，纤维蛋白原(FIB)明显降低(P<0.05)。与模型组相比，阳性对照组和自拟妇血安汤低、高剂量组出血时间、PT、TT明显缩短，FIB明显增高(P<0.05)。自拟妇血安汤低、高剂量组出血时间、PT、TT短于阳性对照组，FIB明显高于阳性对照组，具有显著性意义(P<0.05)。结果见表1。

表1 自拟妇血安汤对大鼠出血时间及凝血功能指标的影响

3.2自拟妇血安汤对大鼠血清性激素水平的影响:结果表明，与空白组相比，模型组大鼠血清E2、P、FSH水平显著升高，LH明显降低(P<0.05)。与模型组相比，阳性对照组和自拟妇血安汤低、高剂量组血清E2、P、FSH水平显著降低，LH显著升高(P<0.05)。自拟妇血安汤低剂量组与阳性对照组E2、P、LH水平比较差异无统计学意义(P>0.05);自拟妇血安汤高剂量组E2、P、FSH水平明显低于阳性对照组，LH明显高于阳性对照组(P<0.05)。结果见表2。

表2 自拟妇血安汤对大鼠血清激素雌二醇孕酮卵泡刺激激素和黄体生成激素的影响

3.3自拟妇血安汤对大鼠子宫和卵巢指数的影响:结果表明，模型组大鼠的子宫系数明显低于空白组(P<0.01)；与模型组比较，自拟妇血安汤低、高剂量组和阳性对照组能显著增加大鼠子宫和卵巢指数(P<0.01)。结果见表3。

表3 自拟妇血安汤对大鼠子宫和卵巢指数的影响

4 讨 论

功能失调性子宫出血是由于下丘脑-垂体-卵巢轴的功能失调造成的[7]。在下丘脑促性腺激素的作用下，垂体分泌卵泡刺激素和黄体酮刺激素，卵泡刺激素主要促进卵泡的各种细胞的生长发育，利于生殖细胞的成熟，并刺激卵巢颗粒细胞的增生，促进卵泡激素的分泌；黄体酮刺激素具有促进排卵的作用，在卵巢周期中期的量达到最高，能使卵泡合成变为黄体，进而分泌孕酮。雌激素具有促进子宫发育，引起肌细胞的增生和肥大，使肌层变厚，子宫内膜增生，血运增加。而孕酮能促进子宫内膜由增生期转化为分泌期，可以拮抗因雌激素分泌过多或持续时间过长所引起的自发破溃出血。因此，调节下丘脑-垂体-卵巢轴功能是改善卵巢功能，促进排卵，治疗功能失调性子宫出血的关键[8]。

中医认为功能失调性子宫出血是因为脾虚统摄无力，冲任失固不能摄血所致[9]。自拟妇血安汤具有活血止血，行气止痛功效，临床上治疗功能失调性子宫出血有显著疗效。本动物实验研究结果表明，自拟妇血安汤能可改善功能失调性子宫出血大鼠模型的凝血功能，能很好的调节下丘脑-垂体-卵巢轴功能，促进卵泡成熟和排卵，增加大鼠子宫和卵巢指数。该结果提示自拟妇血安汤在功血治疗方面有一定疗效，但其作用机制尚需进一步深入研究。