马化鑫， 张进祥， 周游， 袁红, 谢慈妹， 熊全， 陈林强， 徐邦牢， 陈业辉

广州市第一人民医院、华南理工大学附属第二医院 1麻醉科， 2泌尿外科, 3检验科(广东广州 510180)

前列腺癌在欧美国家的发病率及病死率分别居首位及次位，前列腺癌的复发率亦较高，10年内复发率高达50%以上[1-2]。近年来，我国前列腺癌发病率呈逐年上升趋势，前列腺癌发病率在中国男性恶性肿瘤中排名第7位,病死率排名第10位[3]。前列腺癌患者早期症状不典型，容易发生骨转移[4-5]。我国初诊前列腺癌患者的临床分期与西方发达国家相比有很大差异，初诊的前列腺癌患者临床分期较晚，总体预后远差于西方发达国家[6]。故中国前列腺癌筛查专家共识明确指出通过检测TPSA进行前列腺癌筛查可以增加前列腺癌的检出率，发现早期前列腺癌，早诊断早治疗可以提高我国前列腺癌患者总体生存率[7]。目前，利用酶联免疫荧光试纸法进行前列腺癌筛查的国内外文献尚未见报告，我们做了这方面的研究工作，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 在充分知情告知的前提下，收集参与我院前列腺癌筛查的成年男性105例受试者的年龄、血液样本、前列腺体积等资料，105例受试者年龄(60.74±8.77)岁，前列腺体积(39.43±24.28)mL。

1.2 方法

1.2.1 TPSA检测 所有受试者在同一时间同一肘静脉部位用EDTA抗凝管抽取2 mL静脉血和用干燥管抽取3 mL静脉。其中EDTA抗凝管2 mL用酶联免疫荧光试纸法检测，试管转速4 000 r/min离心5 min后，将35 μL血清样本加到试纸卡后放置1 min，使血清渗入试纸，然后将试纸卡插入酶联免疫荧光免疫分析仪(FRENDM System，由日本NanoEnTek, Inc.纳诺恩泰株式会社生产)，检测完毕后，试纸卡自动退出，分析仪将显示检测结果并自动打印结果，检测时间约2 min。另外干燥管3 mL经3 500 r/min 离心 5 min，分离血清于4℃保存，采用常规罗氏Roche Cobas e601 电化学发光试剂法检测。

1.2.2 前列腺体积测定 泌尿系统 B 型超声检查，检测有无前列腺结节及前列腺癌病变，并测定前列腺体积。超声检测诊断仪器型号为 HITACHI Avius，HIVISION,探头频率 5.0 MHz，通过彩超显像以及多普勒血流成像技术观察前列腺的大小，形态及其内的回声血流情况，测量前列腺前后、左右、上下径，计算前列腺体积，计算公式为：(前后径×上下径×左右径)π/6。

1.3 统计学方法 采用 SPSS 20.0统计软件，组间比较采用配对样本t检验，并做线性相关分析。以P<0.05 为差异和相关性有统计学意义。

2 结果

2.1 筛查结果 105例前列腺癌筛查受试者中，TPSA异常者在后续磁共振及前列腺穿刺活检病例证实前列腺癌共2例。

2.2 酶联免疫荧光试纸法与常规电化学发光试剂法两种方法检测获得TPSA数值的配对比较结果 105例受试者中，两种检测方法测得的TPSA数值差异有统计学意义(P<0.01)。以常规电化学发光试剂法测得的TPSA数值为参照标准，当TPSA>4.00 μL/L和当TPSA<4.00 μL/L时，这两种检测方法测得的TPSA数值差异均有统计学意义(P<0.01)，见表1。

表1 两种检测方法TPSA数值配对比较结果

2.3 酶联免疫荧光试纸法与常规电化学发光试剂法两种方法检测获得TPSA数值相互之间的相关性分析 在总体受试者、TPSA>4.00 μg/L组、TPSA<4.00 μg/L组3组病例中，这两种检测方法所获得的TPSA数值之间均具有较高的相关性(P<0.01)，见表2。总体受试者、TPSA>4.00 μg/L组、TPSA<4.00 μg/L组3组这两种方法的相关性散点图见图1～3。

图1 总体受试者的相关性散点图

图2 TPSA>4.00 μg/L组的相关性散点图

图3 TPSA<4.00 μg/L组的相关性散点图

表2 两种检测方法TPSA数值相互之间的相关性分析

2.4 酶联免疫荧光试纸法与常规电化学发光试剂法两种方法检测获得TPSA数值与前列腺体积之间的相关性分析 这两种方法测得的TPSA数值均与前列腺体积具有较高的相关性(P<0.01)，见表3。这两种检测方法TPSA数值与前列腺体积之间的相关性散点图见图4～5。

表3 两种检测方法TPSA数值与前列腺体积之间的相关性分析

图4 试纸法与前列腺体积的相关性散点图

图5 试剂法与前列腺体积的相关性散点图

3 讨论

中国前列腺癌的发病率正在逐年上升，初次确诊前列腺癌患者的临床分期比较晚，总体预后比较差。所以，对高危前列腺癌人群进行筛查，以达到早期诊断和早期治疗，是提高中国前列腺癌患者总体生存率的有效手段。

到目前为止，对于前列腺癌的检测、分期、治疗后的监测等方面，没有一种生物标志物比TPSA更具有临床价值。在前列腺癌的筛查方面，国内外推荐进行血清TPSA检测，不推荐将MRI检查、PCA3检测、4K score检测、P2PSA检测、前列腺健康指数等作为前列腺癌筛查的常规手段[7]。

中国抗癌协会泌尿男生殖系统肿瘤专业委员会的前列腺癌学组形成的相关专家共识表明：通过前列腺癌筛查可以有效增加前列腺癌的检出率，可以发现早期前列腺癌。特别是对于预期寿命10年以上的男性和前列腺癌高危人群，定期进行TPSA检测是必要的[4-5,7]。

TPSA的检测方法包括酶联免疫吸附法、放射免疫分析法、胶乳增强免疫比浊法、时间分辨荧光免疫分析法、胶体金法、微磁粒分离酶联免疫法、流式荧光免疫法等，但都存在如荧光背景突光、放射性废物、荧光淬灭、测定范围有限、灵敏度不佳、标记物稳定性差等缺点。不同TPSA检测系统在检测结果上存在一定差异，给临床前列腺癌的诊断带来了困惑。电化学发光免疫试剂法是目前最先进的标记免疫测定技术，具有灵敏度高、特异度强、检测范围宽等优点[8-10]，我们医院TPSA检测也是采用电化学发光免疫试剂法。

但电化学发光法试剂法检测所需的仪器设备及试剂价格昂贵，操作程序复杂，检测时间较长，通常是第2天才有结果，不便于进行前列腺癌筛查使用。为促进前列腺癌筛查的顺利开展，有日本公司生产出酶联免疫荧光试纸法分析仪，使用起来方便快捷。应用该检测方法只需将抽血后的试管离心5 min，血清渗入试纸1 min，将试纸插入分析仪检测2 min出结果，所以从抽血到出TPSA的检测结果只需要8 min，很大程度上节省筛查的时间、人力等成本。

我们的研究发现酶联免疫发光试纸法测得的TPSA数值略低于电化学发光试剂法测得的TPSA数值，差值均值为0.41 μg/L。但这两种检测方法所获得的TPSA数值之间具有较高的相关性，而且这两种检测方法所获得的TPSA数值与前列腺体积也均具有较高的相关性。这些研究结果表明：在前列腺癌筛查中，酶联免疫发光试纸法测得的TPSA数值与电化学发光试剂法测得的TPSA数值的差异是可以接受的，筛查过程中酶联免疫试纸法检测所得TPSA也可以通过本研究中不同TPSA区间的线性回归方程来校正。另外，酶联免疫试纸法检测TPSA方法便捷，对设备要求不高，检测过程具有经济、快速的特点，所以酶联免疫试纸法可以作为前列腺癌筛查工作中TPSA的检测方法。

需注意的是此款酶联免疫试纸法TPSA检测范围为0.10～25.00 μg/L，检测范围比较窄，灵敏度、特异度、准确度有待进一步提升，不能单独作为确诊或排除前列腺癌的依据。对于该方法检测结果异常者，前列腺癌筛查团队的成员应及时与筛查对象沟通，必要时安排磁共振、前列腺穿刺活检等检查进一步明确前列腺癌的可能性。

综上所述，利用酶联免疫试纸法检测TPSA可用于临床前列腺癌的筛查，是一种有效、便捷、经济的早期筛查诊断方法，可在前列腺癌筛查工作中推广应用。