扩展莫尼茨绦虫vasa基因的原核表达及多克隆抗体的制备
2020-07-21钱凌霄王正荣李红欢张艳艳王炜烨薄新文石河子大学动物科技学院新疆石河子83000省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室新疆农垦科学院畜牧兽医研究所新疆石河子83000
钱凌霄,王正荣,李红欢,刘 乙,张艳艳,王炜烨,薄新文*,马 勋* (.石河子大学 动物科技学院,新疆 石河子 83000;.省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所,新疆 石河子 83000)
*Correspondingauthors,E-mail:maxun@126.com;851661263@qq.com
扩展莫尼茨绦虫(Monieziaexpansa)属于扁形动物门,绦虫纲、圆叶目、裸头科、莫尼茨属,其主要寄生于牛、羊、鹿等反刍动物的小肠,发病后会导致腹泻,贫血、生长发育缓慢、机体消瘦,严重感染时还会造成死亡,严重损害养殖业的经济效益[1]。莫尼茨绦虫有发达的生殖系统,每一成熟的节片内有2套成熟的生殖器官,以莫尼茨绦虫为模式生物来研究其他生物甚至人类生殖疾病的发生与治疗,成为当前科研工作者的重要研究课题[2-3]。
vasa基因是DEAD-box(Asp-Glu-Ala-Asp)家族重要的成员之一,该蛋白家族是一类RNA 解旋酶,参与RNA代谢的过程[4]。继果蝇的vasa基因克隆之后,生殖细胞中表达的vasa基因同源物目前己经在小鼠、蛙、鸡、斑马鱼、青鳃鱼、虹蹲鱼、真涡虫、海鞘、线虫、人、家蚕等物种中被发现[5]。在鱼类中,vasa基因是PGCs的第1个分子标记同时也是生殖细胞的特异性分子标记[6]。
根据扩展莫尼茨绦虫基因组数据库选择vasa基因,并对其部分片段进行扩增,用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE鉴定并纯化。纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,为进一步探究VASA在虫体分布及其生物学功能奠定基础。
1 材料与方法
1.1 试验动物新西兰大白兔购自江苏省农业科学院;扩展莫尼茨绦虫采自石河子牛羊定点屠宰场。
1.2 主要试剂弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂购自Sigma公司;……
