犬源干扰素刺激基因ISG15和IFIT2荧光定量PCR检测方法的建立及应用
2020-07-21王改丽程悦宁张淑琴王建科程世鹏中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室吉林长春302吉林省畜牧兽医科学研究院吉林长春30062
王改丽,程悦宁,张淑琴,王建科,王 超,孙 娜,易 立,程世鹏* (.中国农业科学院 特产研究所 农业部经济动物疫病重点实验室,吉林 长春302;2.吉林省畜牧兽医科学研究院,吉林 长春 30062)
犬瘟热(canine distemper,CD)是由犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)感染犬科及其他肉食性动物引起的烈性传染性疾病,该病呈世界性分布[1]。CDV为有囊膜的负链单股RNA病毒,副黏病毒科麻疹病毒属成员。犬科动物感染CDV后可诱发全身性和/或神经性临床病变,病毒在中枢神经系统和淋巴组织中持续存在,临床表现为胃肠炎、卡他性肺炎、免疫抑制和脱髓鞘性白质脑脊髓炎[2]。CDV感染引起的免疫抑制是引起被感染动物高发病率、高死亡率的主要因素。宿主在受到病毒侵染时会进行识别并做出快而有效的抗病毒反应。其中,IFN信号在机体抗病毒反应过程中发挥着重要作用。Ⅰ型干扰素可以调节多种干扰素刺激基因(IFN-stimulated genes,ISGs)的表达,发挥抗病毒作用。ISG编码蛋白具有不同的生物效应,能够阻断病毒复制周期的多个阶段,包括进入宿主细胞、阻止蛋白质翻译、复制、新病毒颗粒的组装和传播[3]。此外,ISG还具有免疫调节功能,如募集白细胞和启动适应性免疫等[4]。
前期本研究利用HiSeq测序技术进行了CDV感染前后全转录组的测序分析,发现ISG15和IFIT2(即ISG54)表达显著升高,为了明确ISG15和IFIT2在CDV复制增殖过程中的表达变化,以及二者在CDV感染致宿主免疫抑制过程中的作用,本研究建立了ISG15和IFIT2的SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法,为定量检测ISG15和IFIT2 mRNA转录水平,探讨CDV感染与Ⅰ型IFN免疫应答的分子机制,进一步研究CDV感染致宿主免疫抑制机制提供有效的技术手段。……
