小麦‘Fielder’ ω-醇溶蛋白基因及启动子的克隆与序列分析
2020-07-21郭丹丹李保云
郭丹丹 李保云
(中国农业大学 农学院/北京市作物遗传改良重点实验室/教育部作物杂种优势研究与利用重点实验室,北京 100193)
小麦是世界上重要的三大粮食作物之一。小麦具有面筋蛋白,所以能够被加工成面条、面包、馒头和饼干等各种面食品。面筋蛋白主要由单体形式的醇溶蛋白和多聚体形式的谷蛋白组成。根据在酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Acid polyacrylamide-gel electrophoresis,A-PAGE)中迁移率的不同,醇溶蛋白可分为α-、β-、γ-和ω-醇溶蛋白4种类型,其中α-、β-、γ-醇溶蛋白中脯氨酸、苯丙氨酸和谷氨酰胺的含量较少,但是含硫氨基酸较多,因此被称为富硫醇溶蛋白,其中的半胱氨酸是维持单肽及肽链间二硫键的重要因素;而ω-醇溶蛋白通常不含半胱氨酸,无法参与链内或链间二硫键的形成,多数只含1个甲硫氨酸残基,因此被称为贫硫醇溶蛋白,有少数ω-醇溶蛋白含有奇数个半胱氨酸残基,能够参与谷蛋白聚合体的形成,导致面粉的品质变劣[1-3]。醇溶蛋白含有能够诱发麸质不耐受人群乳糜泻(Celiac disease,CD)疾病的肽段,主要类型是α-、β-和γ-醇溶蛋白,在ω-醇溶蛋白中也含有部分肽段[4]。通过RNAi介导使醇溶蛋白含量降低或沉默,能够在不影响总蛋白和淀粉含量的前提下达到降低CD毒性的目的[5]。因此克隆ω-醇溶蛋白基因对小麦品质的遗传改良具有重要意义。
ω-醇溶蛋白基因的基本结构,包括信号肽、N末端非重复区、占肽段90%~96%的中间重复区及C末端非重复区4部分[6]。六倍体小麦可能含有 15~18 个ω-醇溶蛋白基因[7],编码基因位于第1部分同源染色体短臂上[8],由1A、1D染色体基因编码的蛋白在A-PAGE上的迁移率较慢,称为ω1,2-醇溶蛋白(46~58 ku),推导的氨基酸序列N末端前3个通常为ARE/Q或KEL;……
