魏海萍，郭 佳，葛朝明，邵康梅，王浩泰，卢 妮，王 欢*

(兰州大学 1.第二医院 神经内科； 2.第二临床医学院，甘肃 兰州 730030)

缺血性卒中(ischemic stroke)发病率高，危害大，但治疗措施有限[1]。缺血后神经元的恢复与脑梗死的愈后相关[2]。微小RNAs(microRNAs, miRNAs)与靶信使RNA(mRNA)结合，在转录后水平对靶蛋白进行负性调节[3]。有报道miR-338-3p可通过靶蛋白调控细胞增殖、调亡[4]。但miR-338-3p与神经元缺血方面的研究尚未见报道。

蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)属于苏氨酸/丝氨酸蛋白激酶家族，参与各类细胞内生物事件，如细胞自噬[5]。其中cPKCγ只存在于脑和脊髓神经元[6]。前期利用小鼠脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)小鼠和氧-糖剥夺(oxygen glucose deprivation，OGD)/复糖复氧(reoxgenation, R)神经元，发现cPKCγ的激活发挥神经保护作用[7]。已报道cPKCγ通过Akt-mTOR通路调节神经元自噬减轻缺血性卒中鼠脑损伤[8]。基于此，本研究探讨cPKCγ在脑缺血中与miR-338-3p的相关性，以及miR-338-3p对缺血神经元存活率及死亡率的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

雄性SFP级C57BL/6J小鼠(体质量为22～24 g)及C57BL/6J乳鼠[兰州大学实验动物中心,SCXK(甘)2018-0002号];miR-338-3p慢病毒(negative control, NC)(上海吉凯基因化学技术有限公司)；兔源性cPKCγ多克隆抗体(Santa Cruze公司)；抗actin鼠源性单克隆抗体(Sigma-Aldrich公司)；MTT(噻唑兰)试剂盒(Applichem公司)；ECL发光试剂盒(北京威格拉斯生物技术有限公司)；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔 IgG抗体(北京中山金桥生物技术有限公司)；miRNA反转录以及荧光定量试剂盒(北京天根生化有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠及神经元的分组及处理：将小鼠分为：对照组、假手术组、1 h MCAO/R 24、48和72 h组。MCAO/R用线栓阻塞大脑中动脉1 h，拔出线栓恢复血流，整个手术过程平均80 min内完成。将神经元分为：常氧组(normoxia group)、1 h OGD/R 0、6、12和24 h组。OGD/R方法：取24 h内出生的乳鼠皮质组织，制备好后种植，置37 ℃、通以5% CO2/95% O2混合气体、饱和湿度的CO2孵箱内培养。……