武夷岩茶对酒精性肝损伤大鼠的护肝作用

2020-07-09张国寿徐晓斌柴文卿陈吓俤

武夷学院学报 2020年3期

张国寿，徐晓斌，柴文卿，陈吓俤

（1.武夷学院旅游学院，福建武夷山 354300；2.武夷学院茶与食品学院，福建武夷山 354300；3.武夷山市立医院康复科，福建武夷山 354300）

酒精性肝损伤属于临床中常见的肝脏疾病，大部分患者有过量饮酒的嗜好，机体代谢酒精的主要器官为肝脏，过量饮酒可对肝脏造成损伤，继而导致肝代谢酒精能力下降。长期过量饮酒，则出现恶性循环，主要表现为肝肿大、脂肪肝、肝硬化、肝衰竭等[1]。茶作为珍贵的天然草本植物流传于民间作药品治病已有数千年的历史，茶多酚作为一种天然抗氧化剂，是从茶叶中提取的多酚类物质的总称，现代研究证实其具有多种生物药理作用，如抗菌、抗病毒、抗癌、保护心血管系统等作用[2-3]。武夷岩茶作为我国十大名茶之一，产于“双世遗”地武夷山，茶树生长在岩缝之中，武夷岩茶因岩得韵，茶叶品质优异[4]。类似延缓衰老、预防心血管疾病、减肥降脂等武夷岩茶的保健作用已见报，而有关其对酒精肝的护肝作用还未见报道。本实验通过小剂量、长时间酒精灌胃建立酒精肝动物疾病模型,采用不同剂量武夷岩茶干预，检测肝功能和肝组织病理，观察武夷岩茶对酒精性肝损伤的保护作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料

清洁级SD大鼠60只，体重120±15 g，购于斯莱克实验动物有限责任公司（上海）,合格证号:SCXK(沪)2012-0010。武夷岩茶由武夷山秀杆茗茶有限责任公司提供，红星牌62%(体积分数)白酒(北京酿酒总厂)；ALT测定试剂盒、AST测定试剂盒、TG试剂盒（宁波普瑞柏生物技术有限公司），SOD测试盒、MDA测试盒、GSH-Px测试盒(上海拜力生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 茶汤制备方法

武夷岩茶磨碎后，80目过筛，沸水浸提，粗滤，精滤，旋转浓缩蒸发仪浓缩，得浓度为1 kg/L茶汤，低温保存。

1.2.2 动物分组与处理

实验分成5组，Normal组，Model组，武夷岩茶L、M、H组，每组清洁级SD雄性大鼠12只。除Normal组外，其余各组大鼠以7 g/(kg·d)酒精灌胃[5]，同时武夷岩茶L、M、H组分别以剂量为0.75、1.50、3.00 g/(kg·d)的武夷岩茶制成的茶汤灌胃，Normal组则予以相同体积生理盐水灌胃。

1.2.3 检测指标

第8周末，大鼠禁食10 h，正常饮水，乙醚麻醉后，正中切口进腹，于下腔静脉穿刺,抽取血液标本,分离肝组织，检测血清肝功能指标ALT、AST、TG，切取肝脏组织，制备10%的肝脏匀浆，检测肝脏组织中SOD、GSH-Px、MDA水平，按试剂盒说明书进行标本检测。将肝组织标本置入4%多聚甲醛溶液固定，肝脏组织HE染色，进行组织病理学检查，观察肝细胞的炎症、变性、坏死等病理改变。

1.2.4 数据处理方法

采用SPSS软件处理数据，结果以mean±SD表示，各组间数据进行方差齐性检验和方差分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 武夷岩茶对酒精性肝损伤大鼠肝功能的影响

表1可知，Model组ALT、AST、TG水平均显著高于Normal组（P＜0.01），表明酒精性肝损伤大鼠造模成功；武夷岩茶各剂量组ALT、AST水平均显著低于Model组（P＜0.05），武夷岩茶H组TG水平显著低于Model组（P＜0.05）。

表1 武夷岩茶对大鼠血清ALT、AST、TG水平的影响(mean±SD)Tab.1 Effect of Wuyi rock tea on ALT,AST and TG in serum in rats

2.2 武夷岩茶对酒精性肝损伤大鼠抗氧化功能的影响

肝脏组织检测结果显示（表2），SOD、GSH-Px水平，Model组均显著低于Normal组（P＜0.01），MDA水平则相反，与酒精性肝损伤疾病的临床表现相符合；武夷岩茶各剂量组中，M、H组的SOD、GSH-Px水平均较Model组显著增高（P＜0.05），MDA水平则相反，L组各项检测结果较Model组则均无显著差异 (P＞0.05)。

表2 武夷岩茶对大鼠肝组织SOD、GSH-Px、MDA水平的影响(mean±SD)Tab.2 Effect of Wuyi rock tea on SOD,GSH-Px and MDA of liver tissue in rats

2.3 武夷岩茶对酒精性肝损伤大鼠病理改变的影响

各组肝组织HE染色，显微镜放大倍数为100倍，观察肝细胞损伤程度。Normal组大鼠肝细胞正常，肝小叶完整，肝细胞索整齐排列，呈放射状，无炎细胞浸润，未见脂肪变性（图1）；Model组大鼠肝脏中央静脉的周围血液瘀滞，肝索紊乱，肝细胞空泡样变性明显，肝细胞片状坏死且炎性细胞浸润（图2）；武夷岩茶L组大鼠肝细胞索排列明显紊乱，肝小叶及汇管区见散发炎细胞浸润，胞浆中见明显大小不等空泡变性，病变较Model组有所减轻（图5）；武夷岩茶M组大鼠肝细胞索排列稍显紊乱，肝小叶及汇管区偶见炎细胞浸润，胞浆中见少量大小不等空泡变性，病变较Model组改善明显（图4）；武夷岩茶H组大鼠肝细胞索略显紊乱，肝小叶及汇管区偶见炎细胞浸润，肝细胞病理表现较接近Normal组（图3）。

图1 正常组（HE,100×）Fig.1 Normal group（HE,100×）

图3 高剂量组（HE,100×）Fig.3 High dose group（HE,100×）

图4 中剂量组（HE,100×）Fig.4 Middle dose group（HE,100×）

图5 低剂量组（HE,100×）Fig.5 Low dose group（HE,100×）

3 讨论

肝脏是酒精损害的主要靶器官，在酒精代谢过程中生成大量的活性氧自由基（ROS），如超氧阴离子(·O2-)、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(·OH)，过多的ROS致使肝细胞膜和线粒体膜中多价不饱和脂肪酸过氧化，造成损害，出现肝细胞坏死、破裂，血液中表现为ALT和AST升高。酒精性肝损伤进展过程中，出现脂肪代谢紊乱、脂质过氧化、血液中TG含量增高，表现为脂肪肝和肝纤维化改变[6-7]。从本实验检测结果得出，各剂量组武夷岩茶均可降低AST、ALT(P＜0.05)，武夷岩茶H组可降低TG(P＜0.05)，说明武夷岩茶对酒精性肝损伤大鼠的肝脏具有保护作用，减轻肝脏组织细胞破裂、坏死，且能抑制其脂质过氧化水平。

机体摄入酒精后，少部分经肺、肾排出体外，大部分由肝脏代谢，长期过量饮酒超出肝脏代谢负荷，导致酒精在肝内蓄积，出现脂质代谢紊乱，其为酒精肝损伤的重要发病机制，主要表现为代谢过程中乙醇氧化生成乙醛产生大量ROS，为清除ROS消耗机体内大量的抗氧化物质SOD、GSH-Px，引起后者在体内的含量均显著下降[8]，机体内出现抗氧化能力下降而脂质过氧化反应的增强，脂质过氧化反应的终产物MDA生成增加，导致酒精性肝病的病理变化[9-10]。从本实验生化检测结果得出，武夷岩茶H、M组对SOD和GSH-Px的含量的升高作用明显（P＜0.05），武夷岩茶H、M组MDA的含量有明显降低（P＜0.05），病理检测结果亦显示，武夷岩茶H、M组与Model组相比较病理损害程度明显改善，这可能与武夷岩茶具有抗氧化和清除体内自由基的作用有关。