肖彩仙 段 恒 袁真英

（重庆医科大学中医药学院， 中医药防治代谢性疾病重庆市重点实验室， 重庆400016）

卵母细胞的体外成熟（in vitro maturation，IVM） 作为体外授精-胚胎移植衍生的新兴技术，与传统的体外受精-胚胎移植技术相比，卵母细胞的体外成熟避免了卵巢过度刺激综合征的发生，可以为因遗传、免疫及分泌等因素而不孕的患者提供成熟卵母细胞，为治疗不孕提供一条新途径［1］。但是由于卵母细胞体外成熟率低，临床妊娠率仍徘徊在35%～40%［2］。补肾中药介入辅助生殖技术具有提高卵细胞质量的作用，前期动物实验也证实了养精种玉汤可以促进卵母细胞的成熟［3］。因此，本实验旨在前期研究基础之上，进一步探讨养精种玉汤促卵母细胞体外成熟的机制。

1 材料

1.1 动物 8～10 周龄雌性SPF 级KM 小鼠65 只，体质量25～30 g，12 周龄雄性SPF 级KM 小鼠20 只，体质量30～35 g，购自重庆医科大学动物实验中心。使用许可证号SYXK（渝） 2018-0003。

1.2 药物 养精种玉汤由熟地、当归、白芍、山萸肉（2∶1∶1∶1）组成，药材购自重庆桐君阁大药房连锁有限责任公司，经中药鉴定师费耀副教授根据2015 版《中国药典》 鉴定为正品，养精种玉汤由重庆医科大学中医药学院中药教研室制备成1.5 g 生药／mL 浸膏；孕马血清促性腺激素（PMSG，1 000 U／支，批号110044564） 购自浙江省宁波市三生药业有限公司生产；注射用尿促卵泡激素（FSH，75 U／瓶，批号H20052130，丽珠集团丽珠制药厂）。

1.3 试剂 M199 培养基（美国Gibco 公司，货号12340030）；胎牛血清（以色列BI 公司，货号04-400-1B）；石蜡油（美国Sigma 公司，货号8042-47-5）；TritonX-100（北京索莱宝科技有限公司，货号T8200）；DAPI（北京索莱宝科技有限公司，货号C0065）；……