吴静鸣，黄晓青，曹阳，黄顺旺

作者单位：1安徽天星医药集团有限公司，安徽 合肥230601；2合肥创新医药技术有限公司，安徽 合肥230088

柴葛解肌颗粒系根据经典名方明代陶华所著《伤寒六书》收载的“柴葛解肌汤”研制而成的中药六类新药，由柴胡、葛根、羌活、白芷、黄芩、甘草、大枣、石膏等11味药材组成，具有解肌清热功效，临床用于治疗感冒、流行性感冒等，治疗小儿高热不退，并具有热退不反复的显著疗效。原方为汤剂，本研究拟采用水提醇沉工艺将该经典名方开发成为临床疗效好，服用量小，病人依从性好的现代中成药。

该处方中石膏为臣药，清内郁之热，文献报道其主要成分为含水硫酸钙[1]，钙离子为石膏中所含的主要离子成分，石膏对动物造模所致的发热具有一定的解热作用。本研究于2018年5月至2019年2月对柴葛解肌颗粒提取纯化工艺中醇沉前后浸膏中钙离子进行含量测定并对解热药效作用进行对比研究，说明生产工艺选择醇沉的合理性。

1 材料

1.1 仪器 KDM型可调控温电热套（山东鄄城华鲁电热仪器有限公司）；Laws-500T型纯化水机（杭州永洁达净化科技有限公司）；STW0101型山佳高精度数字式电子体温计[山佳国际工贸（天津）有限公司]。

1.2 试药 柴胡、葛根、羌活、白芷、石膏（含水硫酸钙含量为96.5%）等11味药材购于安徽普仁中药饮片有限公司；乙二胺四醋酸二钠（西陇化工股份有限公司）；钙黄绿素（天津市光复精细化工研究所）；2，4-二硝基苯酚（上海试剂三厂）；大肠杆菌标准菌株（安徽省食品药品检验研究院提供）；金莲清热颗粒（宁夏启元药业有限公司，生产批号20170609）；所用试剂均为分析纯。

1.3 动物 SPF级SD大鼠53只，体质量范围为200～220 g，动物合格证号34000200000367，由安徽省实验动物中心提供；普通级家兔30只，体质量范围为1.8～2.2 kg，动物合格证号0030686，由南京安立默科技有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 醇沉前后浸膏相关成分含量

2.1.1 醇沉前后浸膏的制备 柴胡、羌活、白芷和生姜四味药材提取挥发油；以上药渣与葛根、甘草、白芍等其余七味药材合并加10倍量纯化水煎煮2次，每次2 h，滤过。合并上述各滤液，滤液按重量分为均等两份，一份滤液浓缩至含原药材0.1 g/mL，以备测定醇沉前钙离子含量用；另一份滤液浓缩至相对密度为1.15左右（80℃）的浸膏，放冷，加入乙醇至含醇量为50%，静置24 h，滤过，回收乙醇至无醇味，用纯化水调至含原药材0.1 g/mL，以备测定醇沉后钙离子含量用，做3次平行试验。

2.1.2 试剂配制 EDTA-2Na（乙二胺四醋酸二钠）溶液的配制[1]：取EDTA-2 Na·H2O 18.61 g，溶于约300 mL适宜温度的去离子水中，冷却后稀释至1 L，摇匀即得EDTA-2Na滴定溶液（0.05 mol/L）。钙指示剂的配制[2]：取钙黄绿素0.3 g，加氯化钾30 g，研磨均匀，即得。

2.1.3 阴性对照试验 依据本品处方比例制备不含石膏的阴性对照溶液，按照2.1.4项下方法进行测定，测得消耗EDTA-2 Na滴定液（0.05 mol/L）为0 mL，结果表明对照溶液对测定无干扰。

2.1.4 钙离子含量的测定 精密吸取上述醇沉前和醇沉后溶液各5 mL，加纯化水20 mL，氢氧化钠溶液调pH＞12，加入少许钙指示剂，用EDTA-2 Na滴定溶液（0.05 mol/L）进行滴定，直至溶液由紫红色变为纯蓝色时为止。根据EDTA-2 Na滴定液消耗量计算钙离子含量。每1毫升EDTA-2 Na滴定液（0.05 mol/L）相当于8.608 mg的含水硫酸钙[1-5]。

2.1.5 水煎醇沉前后钙离子煎出量试验结果 柴葛解肌颗粒水煎醇沉前、水煎醇沉后钙离子煎出量试验结果见表1。

表1 醇沉前后钙离子煎出量试验结果（n＝3）

根据表1，柴葛解肌颗粒水煎醇沉前后含水硫酸钙含量比较，醇沉后含量减少接近1/3。

2.2 统计学方法 采用SPSS 11.0统计软件进行单因素方差分析（one-way ANOVA）统计处理，结果用表示，P＜0.05为差异有统计意义。

2.3 药效学考察［6⁃15］

2.3.1 醇沉前后浸膏对2，4-二硝基苯酚致大鼠发热模型的影响 选取体温正常（37.0～38.0℃）、测定2次体温后温差≤0.3℃的大鼠53只，分成四组，分别为0.9%氯化钠溶液组（0.70 mL/100 g）、阳性对照组（金莲清热颗粒2.3 g/kg）、醇沉前组（7.2 g生药/kg，0.70 mL/100 g）、醇沉后组（7.2 g生药/kg，0.70 mL/100 g），每只大鼠背部皮下注射2，4－二硝基苯酚20 mg/kg，当体温升高1℃左右时，各组大鼠分别灌胃相应药物或0.9%氯化钠溶液，在给药后每隔1 h测肛温1次，连续测定3 h。见表2。

表2结果显示：与0.9%氯化钠溶液组比较，给药后2 h和3 h，阳性对照药金莲清热颗粒，醇沉前和醇沉后均可降低大鼠发热体温（P＜0.05或P＜0.01）；金莲清热颗粒组，醇沉前组和醇沉后组之间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.3.2 醇沉前后浸膏对内毒素致家兔发热模型的影响 实验前间隔30 min测两次肛温，以波动不大于0.2℃者为受试动物，取其均值为基础温度。取体温符合解热实验要求的家兔分为四组，分别为0.9%氯化钠溶液组（5 mL/kg），阳性对照组（金莲清热颗粒1.7 g/kg），醇沉前组（5.2 g生药/kg，5.03 mL/kg），

表2 醇沉前后浸膏对2，4-二硝基苯酚致大鼠发热模型的影响/（℃，）

表2 醇沉前后浸膏对2，4-二硝基苯酚致大鼠发热模型的影响/（℃，）

注：与0.9%氯化钠溶液组相比较，aP＜0.01，bP＜0.05；造模后，金莲清热颗粒组、醇沉前组、醇沉后组之间比较，P＞0.05

组别0.9%氯化钠溶液组金莲清热颗粒组醇沉前组醇沉后组给药后鼠数13 13 14 13剂量0.7 mL/100 g 2.3 g/kg 7.2 g生药/kg 7.2 g生药/kg造模前37.5±0.2 37.5±0.3 37.5±0.3 37.5±0.3造模后39.9±0.6 39.9±0.8 39.8±0.3 39.9±0.4 3 h 39.3±0.3 38.7±0.4a 38.7±0.2a 38.7±0.5b 1 h 39.9±0.7 39.5±0.6 39.4±0.4 39.4±0.6 2 h 39.5±0.3 38.9±0.3a 38.9±0.3a 39.1±0.4b

表3 醇沉前后浸膏对内毒素致家兔发热模型的影响/（℃）

表3 醇沉前后浸膏对内毒素致家兔发热模型的影响/（℃）

注：与0.9%氯化钠溶液组相比较，aP＜0.01，bP＜0.05；造模后，金莲清热颗粒组、醇沉前组、醇沉后组之间比较，P＞0.05

给药后组别 剂量 兔数 基础体温 造模后0.9%氯化钠溶液组金莲清热颗粒组醇沉前组醇沉后组4 h 40.2±0.5 40.1±0.3 40.1±0.3 40.1±0.3 5 mL/kg 1.7 g/kg 5.2 g生药/kg 5.2 g生药/kg 7 8 8 7 39.5±0.4 39.5±0.3 39.5±0.3 39.5±0.3 40.9±0.2 41.0±0.3 40.9±0.3 40.9±0.4 1 h 41.2±0.3 40.9±0.3 40.9±0.4 40.9±0.4 2 h 41.5±0.4 40.9±0.3a 40.6±0.4a 40.6±0.4a 3 h 40.9±0.5 40.5±0.3b 40.5±0.4b 40.5±0.4

醇沉后组（5.2 g生药/kg，5.03 mL/kg）。每组家兔静脉注射大肠杆菌液（106/kg）造模。选择体温升高高于1℃的家兔，分别灌胃相应药物或0.9%氯化钠溶液，观察给药后1、2、3、4 h时各组家兔直肠温度变化。见表3。

表3结果显示：与0.9%氯化钠溶液组比较，给药后2h，金莲清热颗粒、醇沉前和醇沉后可降低家兔发热体温（P＜0.01），给药后3 h，醇沉前和金莲清热颗粒均可降低家兔发热体温（P＜0.05）；金莲清热颗粒组，醇沉前组和醇沉后组之间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

处方中的石膏清热泻火，除烦止渴。口服石膏煎剂，经胃酸作用后，一部分可变为可溶性钙，经肠吸收入血，增加血中钙离子浓度，调节体温中枢而解热[1]。本研究参照相关文献[1-5]，采用络合滴定法测定钙离子在醇沉前后浸膏的溶出情况，考察药液中石膏含量，测定结果可靠、灵敏。

考察柴葛解肌颗粒处方工艺在醇沉前后浸膏对2，4-二硝基苯酚致大鼠发热模型和对内毒素致家兔发热模型的影响，两种浸膏均具有一定的解热作用，且金莲清热颗粒组，醇沉前组和醇沉后组之间比较，差异无统计学意义。

因此，本醇沉工艺（含醇量为50%）虽然钙离子含量减少接近1/3，但从药效学（解热）角度分析仍具有一定的可行性，为柴葛解肌颗粒的提纯工艺提供理论支持。