黎飚 李海 陈建海 杨洁 梁倩 方晓燕 顾建忠

(右江民族医学院，广西 百色 533000)

随着年龄增大，卵巢萎缩，分泌功能下降，严重影响需要性激素维持功能的性器官及受性激素影响的其他器官，从而引起相关疾患〔1～3〕，如卵巢功能退化引起骨质流失，老年智力障碍。所有激素在体内生理作用的强弱，除了与生物效应量呈正比，还受雌激素受体(ER)活性度高低的影响，雌激素也不例外。与雌激素的生理作用密切相关的ER活性度高低受到其基因多态性的影响〔4,5〕。通过普查ER-β基因多态性，找到卵巢功能易退化的相关基因型，提前做好临床预防和治疗。

1 材料和方法

1.1研究对象 没有内脏器、内分泌脏器和妇产科方面疾患，近6个月也没有使用激素(包括性激素类药物)，祖辈近三代为壮族家族，长期居住在广西少数民族地区40～45岁的壮族绝经妇女416例。

1.2实验指标的测测定 常规处理血液样本，-20℃下保存待用。黄体生成素(LH)和促卵泡激素(FSH)、孕酮(P)、雌二醇(E2)均用放免法测定。

1.3测定ER基因分布

1.3.1引物 按文献〔3〕操作得到Rsa Ⅰ酶切引物：引物①：5′-CTGCCACCCTATCTGTATCTTTTCCTATTCTCC-3′，引物②：5′-TCTTTCTCTGCCACCCTGGCGTCGATTATCTGA-3′。

1.3.2提取 样本DNA模板：改良的NaI法提取采集血液标本DNA，测定含量，-20℃条件下存放。

1.3.3常规PCR底物扩增 往复循环32次，对最后产物进行检查。

1.3.4酶切 用PvuⅡ和XbaⅠ进行酶切，对两个限切酶切产物进行电泳，并观察、测定电泳胶片图像结果。

1.4统计学方法 采用SSPS20.0软件进行t检验。

2 结 果

2.1ER-α 基因型分析 PvuⅡ酶切得到3 种基因：PP 型(1.3 kb 大小的1条带)；Pp 型(1.3 kb，860 bp，460 bp大小的3条带)，pp 型(860 bp,460 bp大小的2条带)，见图1。XbaⅠ酶切可以区分出3个基因型：XX型(1.3 kb大小的1条带)，Xx 型(1.3 kb，860 bp，380 bp大小3条带)，xx 型(860 bp,360 bp大小2条带)，见图2。

图1 ER-α基因PvuⅡ多态性电泳

图2 ER-α基因XbaⅠ酶切多态性电泳

2.2ER-α基因PvuⅡ酶切基因与对应性激素水平 血清性激素水平中,PP基因型，Pp基因型,pp基因型,p基因型之间相比较，差异无统计学意义(P>0.05)；而P基因型血清E2、P水平明显低于其他4个基因型(P<0.05)；但FSH和LH水平明显高于其他4基因型组(P<0.01)，见表1。

表1 ER-α基因PvuⅡ酶切基因与对应性激素水平

与其他4个基因型比较：1)P<0.05；2)P<0.01，下表同

2.3ER-α 基因XbaⅠ酶切基因与对应性激素水平 XX，xx,x,X基因型组之间性激素水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；Xx基因型E2、P明显高于其他4个基因型(P<0.05)，LH、FSH明显低于其他4个基因型组(P<0.01)，见表2。

表2 ER-α 基因XbaⅠ酶切基因与对应性激素水平

3 讨 论

人体衰老是由器官退化引起的，卵巢是女性重要生殖和内分泌器官，卵巢衰老退化引起包括子宫、乳腺等一系列性器官衰老退化。绝经是卵巢衰老退化最明显、最典型的表现。卵巢分泌女性激素水平下降，导致绝经和更年期综合征。其影响到心血管系统，神经、内分泌等系统功能状态。雌孕激素对神经的保护作用，表现在增加神经营养因子分泌、改善中枢神经系统血液循环及提供神经组织抗氧化功能，减少中枢神经细胞退化引起阿尔茨海默病。雌激素对骨组织也有保护作用，雌激素促进成骨细胞骨质合成和钙化。卵巢衰老退化，雌孕激素分泌减少所致破骨细胞成熟、泌酸和溶骨而引起的骨质流失〔6,7〕。临床流行病学调查发现，同一雌孕雌孕激素水平，有不同临床表现，这就说明雌激素的生理效应，除了与雌孕激素的量有关，还与其受体的生物活性度密切有关，而受体的生物活性度又与其遗传基因多态性密不可分〔8〕。本研究结果表明P基因人群在相同年龄的情况下，其卵巢衰老更快，其功能退化更为明显。反作用于腺垂体，腺垂体减少促卵泡素分泌〔9,10〕。因此，ER-αP基因型绝经的人群，卵巢功能退化更早，雌激素分泌更少，更容易患雌孕激素缺乏疾病，该提前防治。本研究表明Xx基因型壮族妇女人群，卵巢功能退化相对较慢。而Xx基因型样本血清雌孕激素水平升高，反馈作用于支配卵巢的垂体分泌促进卵巢分泌减素减少。ER-α Xx基因型人群，卵巢功能不易退化，分泌雌激素多，不易患性激素减少性疾病〔10,11〕。