张庆峰，梁志培，李建国，张贵臣，刘军利，杨士柏

(山东医学高等专科学校附属医院，山东 临沂 276000)

目前，在我国治疗肝脏终末期疾病唯一有效的方法就是肝脏移植，但受经济与供体来源短缺的限制，只有部分患者可以接受到此种疗法。为此，积极寻找可以有效替代肝脏功能的产品是临床所面临的问题。本文对去细胞化肝脏生物支架(Decellularized liver biological scaffold，DLBS)的制备进行了初步的分析与研究。

1 资料与方法

1.1动物及试剂 试验动物为30只SD大鼠，体质量250～300 g，雌雄各15只，均由临沂大学实验动物中心提供。对大鼠进行等条件喂养，且对其处理符合《关于善待实验动物的指导性意见》中相关规则。1%曲拉通X-100(Triton X-100)与胰酶-乙二胺四乙酸均由美国signla公司生产与提供，胎牛血清由杭州四季青生物试剂公司生产，DMEM低糖培养基由美国GIBCO公司生产，表皮生长因子及肝细胞生长因子由美国Peprotech公司提供。

1.2方法

1.2.1DLBS的制备 对大鼠应用0.44 ml、3.6%水合氯醛实施腹腔注射麻醉与开腹，通过门静脉插管灌注500 ml、0.01 mmol/L磷酸盐缓冲液(PBS)，5 L、1%Triton X-100，2 L胰酶、0.2 g/L的EDTA，最后利用20LPBS对残留的Triton X-100进行冲洗，灌注速度要控制在10 ml/min，时间共36 h。将灌注完毕的DLBS储存在4℃的PBS液中。

1.2.2DLBS的生物学特征鉴定 随机对DLBS进行多部位的取材，并实施固定、脱水与石蜡包埋，对石蜡实施切片、脱蜡与HE染色。对其胶原纤维的完整性与无细胞核的残存情况进行观察。取1.0 cm×0.8 cm大小的DLBS标本，用2.5%戊二醛进行固定，将其保存在4℃的环境下，应用扫描电镜进行观察。

1.2.3DLBS的细胞相容性鉴定 在-20℃条件下，对DLBS实施冰冻切片(厚度1 mm)，将切片悬浮……