晋海军， 蒋廷红， 王海霞， 申旭峰， 于 花， 朱 姗， 张 嘉

(贵州中医药大学实验中心， 贵阳 550025)

川续断(DipsacusasperoidesC. Y. Cheng et T. M. Ai)为川续断科川续断属植物，药用部位为干燥根，具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏等功效[1]。但不同产地的川续断受不同生态因子影响，导致其药材质量存在一定差异[2-3]。在不同生长环境下，不同产地中药材细胞里面的基因可能是稳定不变的，但是其蛋白质的表达却在时刻发生改变。因此，蛋白质层面的分析有助于我们对不同产地中药材质量差异形成的机制展开研究[4-5]。进行蛋白质组学研究时，蛋白提取过程易造成样品蛋白损失，需要对蛋白的提取过程进行优化，以获得尽可能多的蛋白[6]。目前，在蛋白组层面对不同产地川续断展开研究的报道较少。本研究拟通过对川续断根蛋白提取工艺的响应面优化及对不同产地间川续断根蛋白的SDS-PAGE电泳条带分析，为今后在蛋白质组层面进一步揭示不同产地川续断质量差异形成的分子机制提供基础资料。

1 材料与方法

1.1 材料

供试材料川续断根采自湖北鹤峰、贵州息烽和云南剑川的川续断种植基地，每产地多点随机取样，各采30株，洗净液氮速冻，-80 ℃保存。

1.2 方法

1.2.1 蛋白提取

取3种不同产地川续断的块根各4.0 g 分别剪碎放入研钵中，不断加入液氮，迅速研磨，待研磨成粉末时，用洁净的小勺将其装入离心管中；加入3倍体积蛋白质提取缓冲液(0.5% SDS，65 mmol/L Tris-HCl pH 6.8， 5% β-巯基乙醇，10%甘油)混匀；离心管置于冰上10 min左右，每2 min震荡1次；置于4 ℃冰箱，浸提1 h；4 ℃，15 000 r/min离心15 min；取上清液，加入3倍体积-20 ℃预冷的10%TCA丙酮溶液，混匀后置于-20 ℃冰箱1 h，使蛋白质沉降；……